188847. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liofilizett abszorbeált kombinált vakcinák előállítására
1 188 847 2 A találmány tárgya eljárás liofilezett adszorbeált kombinált vakcinák előállítására. A kombinált vakcinák — például diftéria-tetanusz-pertusszisz vakcina — fontos szerepet játszanak az Egészségügyi Világszervezet kiterjedt védőoltási programjában. A program célja, hogy a legveszélyesebb gyermekkori fertőzőbetegségeket védőoltásokkal megelőzzék. A jelenleg forgalomban levő vakcinák hatékonysága azonban a tárolás során csökken. A pertusszisz komponens hőérzékenysége miatt a Di-Te-Pe vakcinák különösen trópusi körülmények között nagyon rövid ideig tárolhatók, stabilitásuk mintegy 1 — 2 hétre tehető. Az elmúlt években részletesen tanulmányoztuk a pertusszisz és a Di-Te-Pe vakcinák stabilitását (Csizér Z., Joó I., Zsidai J., Hegedűs L. : J. Bioi. Standard 1, 347 — 355, 1973; Çsizér Z., Zsidai J., Joó I. : Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung., 22, 83-93, 1975; Csizér Z., Zsidai J., Joó I.: Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung., 25, 1 -9, 1978). 1960. és 1973. között 53 pertusszisz törzsszuszpenzió keverékkel 400 aktív egérvédési vizsgálatot végeztünk. A vizsgálatok statisztikai elemzése alapján megállapítottuk, hogy 5- 10 °C-on való tárolás esetén 8 év után csökkent a szuszpenziók hatékonysága 4 nemzetközi egység (egyszeri emberi immunizáló adag) érték alá. 1968. és 1974. között 21 Di-Te-Pe vakcinával 207 aktív egérvédési vizsgálatot végeztünk. A vizsgálatok eredményeinek statisztikai elemzéséből megállapítható, hogy a' vakcinák pertussziszkomponensének hatékonysága 5—10°C-on való tárolás esetén 6 év után még megfelel a nemzetközi és hazai előírásoknak (WHO Techn. Rep, Ser,, 638, 37-115, 1979; VI. Magyar Gyógyszerkönyv, 1967). Egy emberi immunizáló adagra számítva a pertusszisz törzsszuszpenzió keverékek évenkénti átlagos hatékonyságcsökkenése 1,01 nemzetközi egység, míg a Di-Te-Pe vakcinák pertusszisz komponenséé 0,35 nemzetközi egység. Az 5- 10°C-os tárolás tehát megfelel a hatékonyság megőrzésére. 37 °C-on való tárolás során azonban a vakcinák hatékonysága már 2 hét alatt jelentősen csökken, trópusi körülmények között pedig még ezt a tárolási hőmérsékletet is nehéz biztosítani. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, amelynek segítségével különböző éghajlati viszonyok között is megfelelően hosszú ideig tárolható kombinált vakcinák állíthatók elő. A találmány alapja az a felismerés, hogy a fenti követelményeknek megfelelő, jó minőségű kombinált vakcinák nyerhetők oly módon, ha a megfelelően koncentrált antigéneket izoelektromos pontjuknak megfelelőhöz közeli pH-jú oldatban oldhatatlan hordozóra adszorbeáljuk, és a liofilezést olyan pH-értéknél végezzük, ahol még nem következik be jelentős deszorpció. A liofilezett vakcina rekonstiluálását azután felhasználáskor puflferrel végezzük, így állítjuk be az oltóanyag semleges pl-I-ját. A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás liofilezett adszorbeált kombinált vakcinák előállítására. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a tetanusz, diftéria, pertusszisz és adott esetben tífusz antigéneket koncentráljuk, és 3 és 6 közötti pH- értéknél oldhatatlan hordozóra adszorbeáljuk, az egyesített oldatok pH-ját 5 és 6 közötti értékre állítjuk be, és az elegyet liofilezzíik. Ismeretes, hogy az antigének optimális adszorpciója az izoelektromos pontnak megfelelő pH körül következik be. Az izoelektromos pontnál sokkal magasabb pH-nál az antigének eluálódnak. A tetanusz-toxoid adszorpciós viszonyait a pH függvényében például a következő táblázatban mutatjuk be. 1. táblázat pH Alumínium-foszfát HOI T* ERICKHÖLT S0N* Alumínium-hidroxid 3,0 100 100 nem mérhető 3,5 100 95 nem mérhető 4,0 90-100 80-85 nem mérhető 4,5 85-90 60-70 nem mérhető 5,0 80-85 60-70 100 5,5 80-85 60 - 70 100 6,0 80-85 50-60 100 7,0 20 10 100 . 7,5 nincs adszorpció 85 8,0 nincs adszorpció 70 8,5 nincs adszorpció 70 * Megjegyzés: alumínium-foszfát előállítási módszerek A kísérletek során milliliterenként 1 mg Aktionnak megfelelő mennyiségű hordozót és 10 KE (kötési egység) letanusz.-loxoidot alkalmaztunk. A táblázat adatai az adszorpció százalékos mértékét fejezik ki a felhasznált tetanusz-toxoidra vonatkoztatva. Az is ismeretes, hogy kombinált antigén-oldat közös pH-értéke az adszorbeáltatáskor nem lehet alacsonyabb, mint az egyedi antigénekre jellemző izoelektromos érték. Ugyanakkor a közös pH- érték nem haladhatja meg azt a pH-értéket, amelynél az izoelektromos pontnak megfelelő pH-értéknél megkötött antigéneknek több, mint 15 %-a eluálódik. A pH beállítására előnyösen nátrium-hidroxid-, illetve sósav-oldatot használhatunk. Oldhatatlan hordozóként előnyösen alumíniumfoszfát vagy alumínium-hidroxid-géll alkalmazhatunk, amelynek mennyiségéi előkísérletekben határozzuk meg. A kísérletek során különböző mennyiségű hordozót adunk azonos koncentrációjú antigén-oldatokhoz, és a kapott niodellvakcinák immunizálóképességét mérjük. így például a tetanusz-toxoid immuneflektusának tengerimalacon végzett vizsgálata során aluminium-hidroxid hordozó esetén a következő eredményeket kaptuk: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
