188657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antikoaguláns hatású mukopoliszacharidok előállítására
1 2 A találmány tárgya^ eljárás antikoaguláns hatású új . Miként ismeretes, a Yin—Wessler aktivitás specifikumukopoliszacharidok, illetve ilyen vegyületeket tártál- sabban jellemző egy adott anyagnak arra a képességére, mazó gyógyászati készítmények előállítására. A talál- hogy a megfelelő kísérlet körülményei között a vér Xa mány szerinti eljárással előállítható mukopoliszachari- aktivált faktorára az antitrombin III által kifejtett indok aktivitása szelektívebb a heparinénál, azaz szelek- g hibitáló hatást fokozza, míg az USP titer a vér vagy vértívebben hatnak a vér X aktivált faktorára vagy Xa2 plazma teljes koagulációjára kifejtett gátló hatásra jelfaktorára, miáltal erős antikoaguláns vagy antitrombo- lemző. tikus hatást fejtenek ki anélkül, hogy vérzés jelent- A Yin—Wessler titer a szerzők által a J. Láb. Clin, kezne. Med., 81, 298—300 (1976) szakirodalmi helyen ismer-Dyen típusú vegyületeknek a gyakorlatban is nagy tetett kísérleti módszerrel mérhető. A USP titer a „Pharhozammal megvalósítható eljárással történő előállí- macopea of the United States of America” (azaz az tása különböző lehetőségeinek vizsgálata közben a Amerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyve) XIX, heparin kémiai úton történő depolimerizációját tanul- kötetének 229—23Ö. oldalán ismertetett módon (lásd mányoztuk elsősorban részletesen. továbbá az USP—NF jelzésű második pótkötet 62. o! Mindenekelőtt megjegyezzük, hogy a „heparin” jg dalán és az USP-NF jelzésű negyedik pótkötet 90. kifejezést a leírásban és az igénypontokban a lehető oldalán; a pótkötetek a „Drug Substances” , illetve legtágabb értelemben használjuk, vagyis e kifejezés alatt „Dosage Forms” címet viselik) mérhető, egyaránt értünk gyógyászati minőségű, kereskedelmi összefoglalva tehát a fentieket, célul tűztük ki nagy forgalomba kerülő heparint és olyan nyers heparint, anti-Xa aktivitású és az Xa faktorral szemben éles szeamelyet például emlősök szöveteiből extrahálással jq Aktivitású, ugyanakkor az általános koagulációs folyanyertünk. matra viszonylag csekély aktivitású mukopoliszacharidok Ismeretes, hogy a heparin úgy fejti ki antikoagu- előállítását heparinból nagy hozammal, iparilag megláns hatását, hogy fokozza az antitrombin ül (ami egy valósítható eljárással. plazmafehérje) inhibitáló hatását a koagulációs folya- Felismertük, hogy ilyen mukopoliszacharidok előmat soronkövetkező enzimatikus reakcióira. Minthogy 25 állíthatók heparinból vagy körülbelül 2000-50 000 azonban a heparin egyidejűleg képes nagy számú olyan molekulasúlyú, heparinszerű komponenseket tartalmazó koagulációs faktort is elnyomni, amelyek részt vesz- frakciókból, például az emlősök szöveteinek extrahálánek a hiperkoagulációs képesség különböző formáinak sa útján nyert frakciókból. Ezekre a mukopoliszacharimegteremtésében és fenntartásában, hatása nem spéci- dókra az jellemző, hogy oldhatók 55-6I°GLtiterű fikus, hanem sokkal inkább globális. 20 hidroalkoholos, azaz vízből és etanolból (Kirk-Othmer: Ha a heparinnak ez az antikoaguláns hatása érté- „Encyclopedia of Chemical Technology”, 2. kiadás, késnék bizonyul, éppen hatásának globális jellegére 8. kötet, 460. oldal) álló közegben; ennél magasabb altekintettel szükségessé válik a kezelés alatt állók koa- koholtartalmú hidroalkoholos közegben hajlamosak ldgulációs fibrinolízis rendszerének újrakiegyensúlyozása. csapódásra és tiszta etanolban oldhatatlanok. Yin— Eddig is ismeretes volt, hogy a heparin salétrom- 25 Wessler és USP-titerük hányadosa legalább 2, célszerűen savval lebontásnak vethető alá [Methods Carbohydr, legalább 3, előnyösen 6-nál sőt különösen előnyösen Chem. 7., 139-141. és Biochemistry, 15. (18), 3932- 10-nél nagyobb. 3942 (1976)], azonban ezeknél a depolimerizációs el- Ezek a mukopoliszacharidok azzal jellemezhetők járásoknál teljes lebontásra törekedtek és így a heparin- továbbá, hogy láncaik végegysége 2,5-anhidro-D-mannóz lánc teljes depolimerizálódását érték el. alapszerkezetű és ennek az alapszerkezetnek a 6-helyzetű À Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 76. (7)., 3198—3202 primer alkoholos funkciója adott esetben szulfoniloxi(1979) szakirodalmi helyről olyan módszer is ismeretes, csoporttal helyettesített. Ez a végcsoport tehát az (I) amellyel 12—18 szaccharid-fragmenst tartalmazó termé- általános képlettel jellemezhető — a képletben R2 jelenkek állíthatók elő dimetoxi-etánban salétromossawal tése hidrogénatom vagy szulfonilcsoport és R, jelentése végzett lebontás, majd immobilizált antitrombinon vég- 4g formil-, hidroxi-metil-, karboxil- vagy rehajtott affinitásos kromatografálás útján. Ezek a frak- -CH2NH(CH2)nOH csoport (a képletben n értéke I, 2, dók eltérő tulaj donságúak a későbbiekben ismertetendő, 3 vagy 4). . . a találmány szerinti eljárással előállított frakciókétól, Előnyös, ha Rj jelentése formil-, karboxi- vagy hidrsőt döntő részük biológiailag egyáltalán nem aktív, el- oxi-metilcsoport. térően a találmány szerinti eljárással előállított frak- gg Különösen előnyösek azok a mukopoliszacharidok, dóktól. amelyek YW/USp titer-aránya 10 körüli vagy ennél na-CéluJ tűztük ki tehát olyan mukopoliszacharidok elő- gyobb, illetve Yin-Wessíer aktivitása 200 lU/mg, előnyöállítását, amelyek a heparinból származnak, azonban sen 250 IU/mg mértéknél nagyobb, biológiai hatásuk kedvezőbb a heparinénál, A találmány szerinti eljárással előállított mukopoli-A heparin depolimerizálásának különböző tényezőit gg szacharid-keveréket alkotó komponensek legalább 95%alapos vizsgálatnak alávetve felismertük, hogy megfele- ának molekulasúlya 2000—8000 dalion, ami 8-40 lően szabályozott körülmények között a heparin láncát szacharid-egységnek felel meg. À maradék depolimerizáolyan részleges depolimerizálódásnak lehet alávetni, ciót nem szenvedett, főleg di- és tetraszacharidokból amelynek következtében rendkívül kedvező antitrom- áll. botikus aktivitású mukopoliszacharidok képződnek, go A találmány szerinti mukopoliszacharid-keveréket Ezek a mukopoliszacharidok képesek az Xa faktort in- a találmány értelmében heparin depolimerizálása útján hibitálni a heparinénál nagyobb szelektivitással, ugyan- állítjuk elő, mégpedig úgy, hogy 2000 és 50 000 közötti akkor globális antikoaguláns aktivitásuk kisebb a hepa- molekulasúlyú heparint szabályozott körülmények körínénál. Ez annyit jelent, hogy ezeknek a termékeknek zött a heparin-láncokat depolimerizálni vagy fragmentálaz esetében a Yin-Wessler titemek az USP literre vonat- gg ni képes ágens, közelebbről.például salétromossav hatá-_ koztatott aránya kedvező. sának tesszük kí, a reakciókörülményeket a salétromos-2 188 657
