188599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fizilógiásan hatásos CH-1 jelű anyag előállítására

1

188 599

2

A találmány szerinti eljárás kiviteli módját a példával szemléltetjük anélkül, hogy a találmány oltalmi körét a példára korlátoznánk.

Példa

Chlorella pyrenoidosa porlasztva szárított porának 1 kg-ját 5 liter forró vízzel 80—90 °C-on 1 órát extraháltak. Az extraktumot 7000 fordulatszámlperc mellett 20 percig centrifugáltuk. A felülűszó folyadékhoz metanolt adtunk 40% koncentrációig és az anyagot egy éjszakán át állni hagytuk 5 °C-on, majd 9000 ford./perc mellett lecentrifugáltuk. A csapadékot vízben feloldottuk és a vizes oldatot cellofán hurkában dializáltuk folyó ionmentes vízzel szemben egy éjszakán át. A dializátumot 6,4*39 cm-es DEAE-cellulóz oszlopon adszorbeáltuk, 0,005 mólos pH = 6,0 foszfát pufferrel kiegyensúlyoztuk és 0,05 n nátrium-hidroxid-oldattal eluáltuk. Minden 10 ml-es frakciót IF indukciós hatásra megvizsgáltunk, a hatékony frakciókat egyesítettük és 1 n sósavval semlegesítettük. Az oldatot egy 4*15 cm-es CM- cellulóz oszlopon engedtük át, azeluátumot betöményítettük és liofilizáltuk. A nyers port kismennyiségű vízben feloldottuk és az oldatot 2,5*50 cm-es DEAESephacel-oszlopon adszorbeáltuk, majd gradiens elúciót végeztünk 500 ml vízzel és 500 ml 0,01 n sósavban oldott 1 mólos nátrium-klorid-oldattal. Minden 10 ml-es frakciót kénsavas antron reagenssel megvizsgáltunk és azokat a frakciókat, amelyekben a cukor nagy koncentrációban volt jelen, egyesítettük, 0,02 n nátriumhidroxid-oldattal semlegesítettük, majd cellofán hurkában dializáltuk csapvízzel szemben egy éjszakán át. A dializátumot ezután 5 • 70 cm-es Sephadex G-75 oszlopra vittük fel. Az eluátumot liofilizáltuk, s így a 200 mg CH-l-et fehér por alakjában kaptuk meg.

Az ábrák rövid magyarázata:

1. ábra: A CH-1 IR-spektruma;

2. ábra: A CH-1 elektroforetikus viselkedése acetát membránon;

3. ábra: A CH-1 ultracentrifugás képe.

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás a fiziológiásán hatásos CH-1 jelű anyag előállítására, amelynek fizikai-kémiai tulajdonságai a következők: 1 2 3

1) legalább szenet, hidrogént, oxigént és nitrogént tartalmaz és elemi analízise a következő:

C: 38,49 %, H: 6,07 %, ■ N: 1,39 %;

2) molekulasúlya: cellofán membránon impermeábilis és ultracentrifugában mért S-értéke 6,15;

3) olvadáspontja: 240°C-nál elszíneződik, majd magasabb hőmérsékleten szenesedik;

. 4) specifikus forgatóképessége: [a]^9 = —9,52° (c = = 1, vízben);

5) UV-spektruma: végabszorpció 0,125 %-os vizes oldatban;

6) Infravörös abszorpciós spektruma: KBr tabletta, abszorpciós sávok 3420, 2930,1640,1380,1125, 1065, 1040, 990, 915, 835 és 800 cm^-nél;

7) oldhatósága: oldódik vízben -oldhatatlan szerves oldószerben, így metanolban;

8) színreakció: pozitív: antron, Molisch és karbazol-kénsav reagenssel, negatív: Folin-Lowry és ninhidrin reagenssel;

9) jellemzői: savanyú kémhatású, cellulóz-acetát típusú membrán elektroforézisnél 0,8 cm-re vándorol a pozitív sarok felé a következő feltételek esetén: 0,1 mólos, pH = 5,0 piridin-ecetsavas közegben, 200 v,4 inA, 20 perc;

10) színe: fehér por;

11) protein: nem mutatható ki (Folin-Lowry színreakcióval);

12) monoszacharid analízis: ramnóz, arabinóz, glükóz, galaktóz és glükuronsav (papírkromatografálással és gázkromatografálással kimutatva 7 %-os kénsavval 2 óra hosszat visszafolyatás közben való hidrolízis után);

13) cukortartalom: 53 % (glükózra számítva),

azzal jellemezve, hogy Chlorella pyrenoidosa sejteket forró vízzel extrahálunk, az extrakthoz vízzel elegyedő szerves oldószert adva frakcionáltan lecsapjuk, a csapadék vizes oldatát dializáljuk és az így kapott dializátumot adszorpciós kromatografálásnak és gélszűrésnek vetjük alá.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az oldószerrel végzett frakcionált lecsapáshoz 1-4 szénatomos alkanolt használunk.

3. A 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy 1-4 szénatomos alkanoiként metanolt használunk.

4. A 3. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a frakcionált lecsapást 40—80 %-os metanollal végezzük.

5. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az adszorpciós kromatografáláshoz adszorbensként DEAE-cellulőzt használunk.

6. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a gélszűréshez 40-120 Mm szemcseátmérőjű, 1000-150 000 molekulasúly elválasztási tartományú, epiklórhidrinnel térhálósított dextránt használunk.

7. Eljárás hatóanyagként az 1. igénypontban meghatározott, fiziológiásán hatásos CH-1 jelű anyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított hatóanyagot a gyógyszerkészítmények szokásos hordozó-, hígító-, töltő- és/vagy egyéb segédanyagaival együtt gyógyszerkészítménnyé kikészítjük.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

3 db ábra