188311. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív poliszacharid-koncentrátumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 31 1 2 g) molekulaszűrővel (Scphadex. G 75) töltött oszlopon vizsgálva 75 QQO-nél alacsonyabb molekulasúlyú anyagot gyakorlatilag nem tartalmaznak, h) savas hidrolízis után glukóz, galaktóz, xilóz, rhamnóz, arabinóz vagy uronsav-komponensekből legalább kettőt, vagy ezek keverékét tartalmazzák, i) patkányláb-carragenin ödémateszttel vizsgálva fenilbutazonnal vagy indomethacinnal összehasonlítható gyülladásgátló hatásuk van, k) LDS0 értékük egéren p.o. nagyobb mint 3000 mg/ testsúly kg (patkányon 2000 mg/testsúly kg). A gyulladásgátló hatás szempontjából előnyös Trigonella foeni-graeci Semenből előállítható poliszacharid, amelynek mólsúlya 100 000-nél nagyobb, nitrogéntartalma legfeljebb 3%, foszfortartalma (P205-ben kifejezve) legfeljebb 4 %, izzítási maradéka legfeljebb 5 %, redukáló cukortartalma legalább 50%, összes cukortartalma legalább 70 %, savas hidrolízis után főként galaktózt és mannózt tartalmaz, gyulladásgátló hatása 10 mg/kg dózisban az előbbi ödéma-teszt alapján legalább 40 %. A találmány szerinti, növényi eredetű poliszacharidkoncentrátumok előállítási eljárásának lényege az, hogy a frissen gyűjtött vagy szárított, esetleg előzetesen szerves oldószerrel kezelt drogot 0—40°C közötti hőmérsékleten, előnyösen előzetes aprítás után vagy aprítással egyidejűleg 1-24 óra hosszat vízzel kezelünk, a szilárd anyagokat elválasztjuk és a vizes részből a jelenlévő fehérjék kicsapása után 1—3 szénatomos alkohollal, acetonnal, vagy 1—3 vegyértékű kationok hozzáadásával poliszacharid-koncentrátumot csapunk ki, amelyet a vizes résztől elválasztunk és kívánt esetben tovább tisztítunk. A vizes kezeléshez a drog súlyára számítva 1—20- szoros mennyiségű vizet használunk. A friss növényt vagy a vízzel kezelt száraz növényt egyes esetekben őröljük, illetve aprítjuk, majd az őrleményt préseljük, a présmaradékot ismételten vízzel kezeljük, majd újra préseljük. A poliszacharid-koncentrátumot vizes oldatból előnyösen metanol vagy etanol hozzáadásával csapjuk ki, majd a vízzel felvett poliszacharid-koncentrátumot ismételt oldással és kicsapással és/vagy 1-3 szén atomos alkohollal végzett extrakcióval tisztítjuk. A vizes kivonatban levő fehérjefrakció elválasztására 40-80 °C közötti hőmérsékletre történő felmelegítést alkalmazunk. A feldolgozás előnyös módja az, hogy a drogot vizes közegben dezintegráljuk. Szárított drog esetében alkalmazhatunk száraz vagy nedves aprítást. A vizes kivonatolás elvégezhető aprítás nélkül, például mag vagy durván aprított gyökérdarabok esetén. A vizes kivonatolást elvégezhetjük hűtéssel + 4°C körüli hőmérsékleten,de bizonyos esetekben a + 30 °C feletti hőmérséklet bizonyult előnyösnek. Előnyben részesítjük a folyamatos feldolgozást, amelynek során a kiindulási anyagot nedvesen aprítjuk, majd alacsony vagy magas nyomáson esetleg ismételten préseljük, a préselt anyagot esetleg ismételten vízzel kezeljük. A kipréselt, illetve extrahált és préseléssel elválasztott folyadék tartalmazza a végtermékként kinyerni kívánt poliszacharid-frakciót. A vizes közegből a koncentrátumot 1—3 szénatomos alkohollal vagy acetonnal, esetleg 1—3 vegyértékű kation felhasználásával csapjuk ki. Az egyes kicsapási módszerek egymással kombinálhatok is. A kinyerhető poliszacharid-koncentrátum súlya a kündulási anyag szárazanyagtartalmára számítva 0,1—10 súly% között ingadozik. További feldolgozási lehetőség az, hogy az aprított növényi anyagot súlyára számítva 1-20-szoros vízzel kivonatoljuk, a kivonatot 60 °C-on hőkezeljük, a hőkezelt kivonatot centrifugálással és szűréssel tisztítjuk, az oldatból a poliszachüridot 2—3-szoros térfogatú alkohollal kicsapjuk és 24 óra állás után a csapadékot centrifugálással vagy szűréssel az anyalúgtól elkülönítjük, és alkohollal kimossuk. A kicsapott nyers poliszacharid-koncentrátum tisztítását úgy végezzük, hogy a nedves anyagot 10-szeres mennyiségű vízben feloldjuk, 75 °C-ra felmelegítjük, a kivált anyagokat centrifugálással eltávolítjuk és a felülúszót 3-szoros térfogatú alkohollal elegyítjük. 24 óra állás után a kivált csapadékot centrifugálással és szűréssel elkülönítjük, alkohollal mossuk és vákuumban legfeljebb 40 °C-on megszárítjuk. További tisztítás úgy érhető el, hogy a szárított terméket 30—40-szeres mennyiségű 50-75 °C közötti vízben feloldjuk, centrifugálással tisztítjuk és 3—10 att nyomás alatt olyan membránon szűrjük át, amely a 75 000-nél alacsonyabb molekulasúlyú anyagokat átereszti, majd a membrán nagymolekulasúlyú oldalán maradt oldatból a poliszacharidot alkohollal kicsapjuk. A vizes oldatból a poliszacharid acetonnal is kicsapható. A gyógyászati készítmény per os vagy parenterális adagolásra alkalmas, formája szerint tabletta, drazsé, kapszula, infúzió, emulzió, injekció, oldat, kúp, implantátum vagy külsőleg alkalmazható oldat, nyák, krém, kenőcs vagy zselé. A gyulladásgátló készítmények gyógyászati vagy kozmetikai célra használhatók és úgy állíthatók elő, hogy a fenti poliszacharid-koncentrátumot gyógyászati vagy kozmetikai készítmények előállítására szokásos segédanyagokkal és/vagy vivőanyagokkal elkeverjük és így ismert módon gyulladásgátló hatású készítményt állítunk elő. A találmány szerint előállított poliszacharid-koncentrátumok gyulladásgátló hatását C. A. Winter és mtsai Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 111. 544 (1962) szerint patkányláb carragenin ödémateszten vizsgáltuk. A koncentrátumok jelentős specifikus aktivitással és ezzel összefüggő rendkívül előnyös gyulladásgátló hatással rendelkeznek feltűnően alacsony toxieitás mellett. A standardként használt fenilbutazon 100 mg/testsúly kg-os dózisával elért 45 %-os gátlással szemben a találmány szerinti korcentrátumok azonos dózisban 70—80 %-os gátlást mutatnak. Hasonló előnyös gyulladásgátló hatás mutatkozik az indomethacinhoz képest is. A biológiai hatás egyszerűen demonstrálható akként, hogy a poliszacharid-koncentrátumot 0,5 % töménységben vízben feloldjuk. A kapott oldat toroköblögetésre, szájöblítésre (pharyngitis, gingivitis), szemmosásra (conjunctivitis), a külső hallójárat gyulladásos megbetegedésénél öblítésre és átitatott gézcsík behelyezésével bo ogatásra alkalmas. A poliszacharídból készített ülőfüidő bevált fissura ani, nodus-hemorrhoidalis, vaginitis, vulvovaginitis kezelésére,emlőblinbó berepedése (rhagad) és lermatitisnél is borogatásra. A találmány szerinti poliszacharidok izolálását és farmakológia! hatását a következő kiviteli példákkal sze mléltetjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 3
