188189. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a természetben előforduló ergolén vázas alkaloidokat, főként ergokornint és ergokriptint együttesen tartalmazó drog parazita módon történő előállítására
1 188 189 2 A találmány tárgya eljárás a természetben előforduló ergoién-vázas alkaloidokat, főként ergokornint ésergokriptint együttesen tartalmazó drog előállítására rozsra virulens új Claviceps purpurea törzs spóratenyészetével. 5 Az ergotoxin három komponensének hidráit származékai, szabatosabban ezek keverékei: a dihidroergokornin, a dihidroergokriptin, valamint a dihidroergokrisztin a gyógyászatban ma is nélkülözhetetlen vegyületek adrenolitikus hatásuk, sze- 10 rotonin aktivitásuk stb. következtében [Straub., F. B. Biológiai Lexikon 1. kötet l71-l'/2. o. (1978) Akadémiai Kiadó. Budapest]. Mintegy 15 éve ismert már, hogy az ergokriptinnek kétféle módosulata van: az alfa- és a béta-ergokriptin. 15 Ismeretes továbbá az is, hogy a természetben előforduló ergoién-vázas alkaloidok két egymástól eltérő módon állíthatók elő: - steril fermentációval ún. szaprofita módon, vagy 20 - parazita eljárással rozs fertőzése útján. Ismeretes e két módszeren kívül totál szintézisük is, ez utóbbi azonban jelenleg még magas költsége miatt a gyakorlatban nem járható út. Ez ideig nem ismeretes olyan Claviceps purpurea 25 törzs, amellyel parazita úton ergokornint és ergokriptint lehet előállítani. Szaprofita úton történő ergokornin és béta-ergokriptin előállítási eljárása már ismeri, a Magyar Szabadalmi Közlöny 86, 8. szám 624. o. (1981) T/20619 szám alatt megjelent 30 teljes vizsgálat közzétételéből, amely szerint a Claviceps purpurea törzs egy új variánsával aerob körülmények között, szén- és nitrogénforrást, ásványi sókat és adott esetben egyéb adalékot(okat) tartalmazó táptalajon végzett fermentációval ergokornin 35 és béta-ergokriptin állítható elő. A szaprofita, ill. parazita úton történő anyarozs alkaloidok előállítása közötti verseny ez ideig még nem dőlt el egyik módszer javára sem, ezért mindkét út továbbfejlesztése kötelező szükségszerűség. 40 A találmány szerinti parazita módszer kidolgozásánál a következő célok vezettek bennünket:- olyan új Claviceps purpurea törzs kinemesítése, amely az eddig ismerteknél lényegesen több alkaloidot tartalmaz, 45- a törzs fermentációs elszaporításával olyan oltóspórát lehessen előállítani, amely a rozs fertőzésére alkalmas, továbbmenőleg ezen oltóspóra a fel-' használásig stabil és a magasabb ergokominergokriptin együttes előállítását biztosítsa. 50 A törzs új variánsával szemben az alábbi követelményeket támasztjuk:- mesterséges táptalajokon, pl. agar-agar felületen és süllyesztett levegőztetett tenyészetben jól spórázzék, 55- a spórák megfelelően rezisztensek, tehát jól tartósíthatok legyenek,- a spórák életképesek, és virulensek legyenek, azaz újra táptalajközegbe juttatva 90-100%-ban kicsírázzanak és rozsra juttatva azt fertőzzék, 60- a területegységenként kifejlődő drog mennyisége nagy legyen,- a drog fő-alkaloidtartalma magas legyen és a főalkaloidokon (ergokornin-ergokriptin) kívül csak jelentéktelen mennyiségű mellékalkaloidot 65 tartalmazzon. Az új törzs előállítását az alábbi módon végeztük: Vad gramineákról (Agropyron repens, Dactylus glomerata, Lohlium sp.) gyűjtött és rozsra szoktatott Claviceps populációkról indítottuk meg a szelekciót. A kiindulási populáció alkaloidtermelő képessége: 3,0 mg/g ergokornin-ergokriptin. A kiindulási populáció házi jelzése KGy-30, amelyet az Országos Közegészségügyi Intézetnél (OKI) 00223 szám alatt deponáltunk. A kiindulási populáció az ivaros folyamatok következtében széles genotípus spektrumot és kiegyenlített életképességet biztosított. A szelekció során a plusz-variánsok kiemelése nagyszériás analitikai módszerrel történt. További szelekció történt a plusz-variánsok között a mikrobiológiai kezelhetőség szempontjából. Az ily módon kiemelt biológiai anyag ivartalan fenntartása, ill. felszaporítása következett parazita fertőzés céljából. A parazita életciklus alapján kapták a törzsek az utolsó gyakorlati szempontú minősítést. A találmányunk szerint kapott új törzs - házi jelzése KGy-5000, amelyet az Országos Közegészségügyi Intézetnél (OKI) 00206 szám alatt helyeztük letétbe - előnyös tulajdonságokkal rendelkezik. Az új törzs a fermentációs és termesztési eljárásokban az alábbi eredményt adja: OKI 206 felületi spóratermelő képesség fermentlé spóraszáma oltóspóra készítmény csíraképessége ezer szem súlya droghozam (kísérleti üzemben) a drog ergokornin-ergokriptin tartalma ergokornin: ergokriptin aránya ergokriptin módosulatok aránya mellékalkaloidok: ergometrin ergotamin egyéb szennyezés, pl. zsíros olajtartalom 2-10° spóra/cső 5-6 • 108 spóra/ml 95-98% 173-200 g 200-300 kg/ha 8-10 mg/g 40-50: 60-50 alfa-ergokriptin : béta-ergokriptin 60-50 : 40-50 0,1 -0,3 mg/g 0,1 mg/g 10-20% A találmány szerinti törzzsel előállítható drogból nyert végtermék alkaloid-összetétele a világpiaci keresletnek megfelelő. A törzs további előnye, hogy a vele előállított drog fajlagos termelőterület igénye, valamint a termesztés egyéb fajlagos ráfordításai kedvezőbbek, mintha az alkaloid komponensekre specifikus drogokat önálló törzsek segítségével külön-külön termesztettük volna. A találmány szerint új törzs morfológiai jellemzői: a) Maláta-agar táptalajon, amelynek összetétele: 6 s% holland malátakivonat, 2 s% difco-agar, 92 s% csapvíz. 2
