188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 081 2 képletü peptidet is, K = 0,33 (a fenti oldószerrendszerben), DC: 157C számú rendszerben: Rf=0,28. A kiindulási anyagként alkalmazott peptideket az alábbi módon állítjuk elő. 6.1 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OH 3,1 g Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-H (amelyet a fentiekben idézett európai szabadalmi bejelentés 1. példa, 1.7 lépésében szereplő módon állítottunk elő) 100 ml dimetilformamiddal készített oldatát 300 mg, aktív szénre felvitt palládium (10%) hozzáadása után 2 órán keresztül hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot nagy vákuumban 20 ml-re betöményítjük, és további tisztítás nélkül használjuk fel a következő, 6.2 lépéshez. 6.2 lépés N3'-2-Trimetilszililetoxikarbonil-Asn-Phe-Phe--(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OH A védett heptapeptid 6.1 lépésben kapott dimetilformamidos oldatát összekeverjük 940 mg 2-trimetilszililetil-szukcinimidilkarbonáttal /COCHj (Me3SiCH2CH2OCOON | ^COCH2 és 0,27 ml N-metil-morfolinnal, és a reagáltatást 45 percen keresztül végezzük szobahőmérsékleten. További 0,13 ml N-metil-morfolin hozzáadása után a reagáltatást további 2 Vi órán keresztül folytatjuk. A terméket 100 ml 0,2 n sósav-oldat becsöpögtetésével 0 °C-on lecsapjuk, és tisztítás céljából három alkalommal etilacetáttal és acetonitrillel eldörzsöljük. DC: 157A számú rendszerben: Rf = 0,29. 6.3 lépés N*-2-Trimetilszililetoxikarbonil-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(4-klór-1 - -naftil)]-Gaba-OH 135 mg N°'-2-trimetilszilil-etoxikarbonil-Asn- Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-OH (6.2 lépés) és 180 mg N-hidroxi-szukcinimid 2 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0 °C hőmérsékleten hozzáadjuk 216 mg N,N'-diciklohexil-karbodiimid 0,8 ml dimetilformamiddal készített oldatát, és az elegyet 4 Vi órán át reagáltatjuk (1. részlet). Eközben 304 mg dl-4-amino-3-(4-klór-l-naftil)vajsavat feloldunk 0,6 ml 2n metanolos benziltrimetilalumíniumhidroxidban 10 ml dimetilformamid és kis mennyiségű víz hozzáadása közben, és nagy vákuumban újra 3,5 ml-re betöményítjük. A zavaros oldatot 0 °C hőmérsékleten hozzáadjuk a fenti 1. részlethez, két alkalommal 0,2-0,2 ml dimetilformamiddal mossuk, és éjszakán át szobahőmérsékleten reagáltatjuk. A terméket 100 ml jéghideg 0,2n sósav-oldat becsöpögtetésével kicsapjuk, leszűrjük és vízzel mossuk. Szárítás után három alkalommal etilacetáttal és acetonitrillel eldörzsöljük. DC: 157A számú rendszerben: Rf = 0,39 és 0,41 (diasztereomerek). Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő dl-4-amino-3-(4-nitro-fenil)-vajsavból kiindulva az N^-trimetilszililetoxikarbonil-Asn-Phe-Phe-fD- lrp)-Lys-(Boc)-Thr(But)-Phe-[dl-/?-(4-nitro-fenil)]Gaba-OH-t, DC: 157A számú rendszerben: Rf=0,37. 6.4 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-[dl-^-klór-naftil)]Gaba-OH-hidroklorid 1,55 g 2-trimetilszililetoxikarbonil-Asn-Phe-Phe(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(4-klórnaftil)]Gaba-OH (6.3 lépés) 4,2 ml dimetilformamiddal készített oldatát 0 “C hőmérsékleten 2 perc alatt összekeverjük 8,6 ml 0,59 mólos, dimetilszulfoxiddal készített tetraetilammóniumfluorid-oldattal, és az elegyet 3 órán keresztül 30 °C-on reagáltatjuk. A terméket 200 ml jéghideg 0,1 n sósavoldat becsöpögtetésével kicsapjuk. A csapadékot centrifugáljuk, jéghideg vízzel mossuk, terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk. A maradékot 3 ml dimetilformamidban feloldjuk, és vízzel újra kicsapjuk. A centrifugálással elkülönített terméket vízzel többször mossuk és nagy vákuumban megszárítjuk. DC: 157A számú rendszerben: Rf=0,09 és 0,12 (diasztereomerek). Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő megfelelő kiindulási anyagokból (lásd 6.3 lépés) a H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe[dl-/?-(4-nitro-fenil)]Gaba-OH-hidrokloridot. DC: 157C számú rendszerben: Rf=0,53 és 0,55 (diasztereomerek). 6.5 lépés CAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/?-(4-klór-l- I naftil)]Gaba —*- B izomer 1,25 g HCl ■ H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr-(But)-Phe-[dl-/?-(4-klór-l-naftil)]Gaba-OH (6.4 lépés), 1,33 g N-hidroxi-benztriazol-monohidrát, 0,1 ml N-metil-morfolin és 1,8 g N,N'-diciklohexil-karbodiimid 800 ml dimetilformamiddal készített oldatát 18 órán keresztül 50 °C hőmérsékleten tartjuk. Az elegy feldolgozása céljából hozzáadunk 1,1 g oxálsavat, az oldatot nagy vákuumban erősen bepároljuk, és a kivált diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletből a terméket híg nátriumhidrogénkarbonát-oldat becsöpögtetésével kicsapjuk. A nyersterméket tisztítás céljából 560-lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá metanol-víz-kloroform-széntetraklorid rendszerben (2700 : 675 : 900 : 1575 térfogatrész). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
