188077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új antibiotikus hatású BMG162-AF2 előállítására
1 188 077 2 ót, port, szemcsés készítményt, tablettát vagy kúpot. Ezekhez a gyógyászati készítményekhez a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és segédanyagokat, például szilárd hordozóanyagokat, folyékony hordozóanyagokat, stabilizátorokat, antiszeptikumokat, fájdalomcsillapítókat és emulgeálószereket hasznosíthatunk, feltéve, hogy a BMG162-aF2 vonatkozásában kémiailag közömbösek. Az injektálható készítmények előállítása során a gyakorlatban úgy járunk el, hogy a BMG162- aF2 antibiotikumot - előnyösen vízoldható sója, például hidrokloridja formájában - és cukrokat, például mannitot feloldunk desztillált vízben, majd az így kapott oldatot fiolákba töltjük, vagy pedig az oldatot liofilizáljuk és beadást megelőzően oldjuk fel fiziológiás konyhasóoldatban vagy desztillált vízben. A gyógyászati készítményekben az egyes komponensek aránya a készítmény jellegétől függően széles határok között változhat, általában azonban a BMG162-aF2 mennyisége 0,01 súly%és 100súly%, előnyösen 0,1 súly% és 70 súly% között változhat, míg a többi anyag összmennyisége 0-99,99 súly.%, előnyösen 30-99,9 súly%. Injektálásra alkalmas készítmény esetén a komponensek mennyisége a következő: BMG162-aF2 0,1-95,0 súly% cukrok 5,0-99,1 súly% nátrium-klorid 0^94,9 súly% Bár a konkrét esetben beadott BMG162-aF2 mennyisége a szimptómáktól függően változhat, felnőttek esetében a napi dózisa rendszerint 0,01-800 mg, előnyösen 0,1-600 mg. Amennyiben hosszabb időn át folyamatosan szükséges alkalmazása, akkor a napi dózist csökkenteni kell. A BMG162-aF2 antibiotikumot tartalmazó gyógyászati készítményekben az antibiotikumot rendszerint gyógyászatilag elfogadható sói, például hidrokloridsói formájában alkalmazzuk. A találmányt közelebbről a következő kiviteli példákkal kívánjuk megvilágitani. 1. példa 500 ml térfogatú Sakaguchi-palackokba 125 125 ml-es mennyiségekben összesen 5 liter olyan folyékony táptalajt töltünk, amely 2,0% glicerint, 2,0 dextrint, 1,0% szója-peptont (a Difco Laboratories amerikai egyesült államokbeli cég Bacto-soytone márkanévvel forgalmazza), 0,3% élesztő-kivonatot (a Daigo-Eiyko-Kagaku Co., Ltd. japán cég terméke), 0,2% ammónium-szulfátot és 0,2% kalciumkarbonátot tartalmaz, továbbá pH-értéke 7,4-re van beállítva. Sterilizálást követően a palackokba 1% mennyiségben olyan oltóanyagot adagolunk, amelyet előzetesen a Bacillus laterosporus BMG162-aF2 FERM-P 5230 (illetve ATCC- 31932) törzzsel azonos összetételű táptalajban agar-agar ferde tenyészeten 2 napon át végzett tenyésztéssel kaptunk. A beoltás után a palackokat 28 °C-on 5 napon át inkubáljuk. Ezt követően a tenyészetek szűrése útján kapott 4900 ml szűrletet felvisszük egy olyan 500 ml-es és 5,2 cm átmérőjű oszlopra, amely a Rohm and Haas Co. amerikai egyesült államokbeli cég által Amberlite IRC-50 márkanéven forgalmazott gyanta Na +-formájú és H+-formájú alakjának 7 : 3 súlyaranyú keverékével van töltve. Az oszlopon az aktív komponens adszorbeálódik. Az oszlopot ezután vízzel mossuk, majd 2000 ml 1 n sósavoldattal eluáljuk és az eluátumot 10 n nátrium-hidroxid-oldattal pH 6-ig semlegesítjük. A semlegesített eluátumot vízzel négyszeresére hígítjuk, majd olyan 400 ml-es és 4,3 cm átmérőjű oszlopra felvisszük, amely a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég által CM-Sephades C-25 márkanév alatt forgalmazott és vízzel végzett előkezelés eredményeképpen duzzasztott gyantát tartalmaz. Az aktív komponens a gyantán adszorbeálódik. Az aktív komponenst ezután 0,3 mólos vizes nátrium-klorid-oldattal eluáljuk, majd az eluátumot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml metanolban oldjuk a nátriumklorid kristályok szüret ut ján \ ló llávolítása céljából. /. zurletet felvisszuk olyan 445 ml térfogatú és 2.6 cm átmérőjű oszlopra, amely a Pharmacia Fien Chemicals áltál Sephadex LH-20 márkanév alatt forgalmazott, szerves oldószerrel gélszűrésre alkalmazható, dextrán alapú és metanollal végzett előkezelés útján duzzasztott gyantával van töltve. Az eluálást metanollal végezzük, majd az aktív komponenst tartalmazó eluátumfrakciókat csökkentett nyomáson bepároljuk, fehér porként 460 mg mennyiségben tiszta BMG162-aF2-hidrokloridot kapva. 2. példa 30 literes kapacitású, rozsdamentes acélból készült tartályba bemérünk 10 liter mennyiségben olyan folyékony táptalajt, amely 2,0% glicerint, 2,0% dextrint, 1,0% az 1. példában említett minőségű szója-peptont, 0,3%, az 1. példában említett minőségű élesztő-extraktumot, 0,2% ammóniums/ulfalót, 0.2% kalcium-karbonátot és 0,03%, habzásgátló ha'.asú szüikonolajat tartalmaz, továbbá pH értéke 7.4-re van beállítva. Ezután 120 °C-on 20 percen át sterilizálást végzünk. Ezt követően a lehűtött tartályban lévő táptalajt aszeptikus körülmények között beoltjuk az 1. példában említett törzs 48 órás rázott tenyészetéből 125 ml-rel, majd keverés és levegőztetés mellett 28 °C-on tenyésztést végzünk. A levegőztetést először 15 liter/perc sebességgel 350 fordulat/perc keverési sebesség mellett, majd 16 óra elteltével ugyanilyen keverési sebesség mellett 10 liter/perc sebességgel végezzük. 40 óra elteltével 9500 ml szürletet nyerünk ki a tenyészetből, majd a szűrletet lényegében az 1. példában ismertetett módon Amberlite IRC-50 és CMSephadex C-25 gyantákat tartalmazó oszlopokon kezeljük. Az utóbb említett gyantát tartalmazó oszlopot 4 liter 0,3 mólos vizes nátrium-klorid-oldattal eluáljuk, 290 cseppből álló frakciókat szedve. Két aktív frakciót különítünk el, mégpedig az I. frakciót (a 14-63. eluátum-frakcíókból áll) és a II. frakciót (a 64-154. eluátum-frakciókból áll). A II. frakció (amely nem tartalmaz olyan anyagot, mely 280 nm-en abszorbeálna) 1660 ml-nyi mennyiségéhez 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
