187836. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amino-propil)-amino-bleomicin származékok előállítására
1 187 836 2 oan szárazra párolva 96 g (90%) hozammal jutunk a bisz(3-amino-propil)-dimetil-ammónium-trihidrokloridhoz. E vegyület túlságosan higroszkópos, s ezért olvadáspontja nem határozható meg. PMR színkép (D20,8): 2,1-2,8 ppm, 4H (m), 2,4 ppm, 6H. (s), 3,1-3,9 ppm, 8H (m). A betűjelzések (zárójelben) jelentése a következő: m = multiple«; s = singulett. Ezek az értékek összhangban vannak a vegyület megadott szerkezetével. IR színkép (hullámszám cm-1) KBr pasztillában, abszorpciós maximumok: 3425, 2975, 2625, 2000, 1600, (480, 1470, 1350, 1320, 1300, 1230, 1200, 1160, 1140, 1060, 1040, 1000, 930, 840, 760. Ha a fenti módon járunk el, azonban 3-(amino- Propil)-dietil-aminból, illetve 3-(amino-propil)dibutil-aminból indulunk ki, akkor bisz(3-amino- Propil)-dietil-ammónium-trihidrokloridot, illetve bisz(3-amino-propil)-dibutil-ammónium-trihidrokloridot kapunk. E vegyületek fizikai-kémiai tulajdonságait a 8. táblázat foglalja össze. 4. példa 53,6 g (2 egyenérték) N-(3-bróm-propil)-ftálimid és 300 ml acetonitril el’egyéhez 13 g N,N,N',N'tetrametil-l,3-diamino-propánt adunk, és utána 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Fehér, kristályos csapadék formájában 1,3-bisz[(3-ftálimidopropil)-dimetiI-amin]-propán-dibromid válik ki. A csapadékot kiszűrjük, acetonitrillel mossuk, szárítjuk: a hozam 90%. E sót 200 ml 6n sósavval ll0°C-on 8 órán át hidrolizáljuk, és lehűtés után a kicsapódott ftálsavat kiszűrjük. A szűrletet 1200 ml térfogatú Dowex®-l Cl-típusú ioncserélő gyantán vezetjük át, és a lecsepegő folyadékot vákuumban szárazra pároljuk. így 28,7 g l,3-bisz-[(3- amino-propil)-dimetil-amino]-propán-tetrahidrokloridot kapunk. E vegyület olvadáspontja higroszkópossága miatt nem határozható meg. PMR színkép (d20, 8, ppm): 2,0-2,9, 6H (m), 3,0-4,0, 12H (m); 3,45, 12H (s). Ezen értékek alapján a szerkezet az, amit fentebb megadtunk. Az Rf és Rm értékek - a 7. táblázatban megadott körülmények között meghatározva - 0,002 illetve 2,56. ÍR színkép (hullámszám, cm-1): abszorpciós maximumok: 3425, 2925, 2600, 2000, 1720, 1600, 1480, 1470, 1400, 1300, 1230, 1200, 1150, 1060, 1000, 960, 920, 900, 850, 760. 5. példa 20 g N-metil-N-benzil-amin és 300 ml tetrahidrofurán elegyéhez 17 g trietil-amint és 89 g N-(3- bróm-propil)-ftálimidet adunk, és utána 17 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált színtelen csapadédot szűrjük és víztartalmú etanolból átkristályositjuk. így 76 g (80%) hozammal színtelen, kristályos anyagot kapunk. Ezt az anyagot 380 g 6n sósavbaVi 110°C hőmérsékleten 8 órán át hidrolizáljuk, majd lehűtés után a kicsapódott ftálsavat kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk a sósav feleslegének eltávolítása céljából, a maradékot desztillált vízben oldjuk, és 200 ml térfogatú Dowex®-l Cl-típusú ioncserélő gyantán vezetjük át. Az oszlopról lecsepegő folyadékot vákuumban szárazra pároljuk, így 41 g (90%) hozammal bisz(3-amino-propil)-N-metil-N-benzil-ammóniumtrihidrokloridot kapunk. E vegyület olvadáspontja higroszkópossága miatt nem határozható meg. PMR színkép (D20, 8, ppm): 1,9-2,8, 4H (m); 2,9-4,0, 8H (m); 3,2, 3H (s); 4,70^1,75, 2H (m); 7,7, 5H (s). Ezen értékek alapján a szerkezet az, amit fentebb megadtunk. Az Rf és Rm értékek - a 7. táblázatban megadott körülmények között meghatározva - 0,29, illetve 2,14. IR színkép (hullámszám cm ') KBr pasztillában, abszorpciós maximumok: 3425, 2975, 2650, 2000. 1600, 1470, 1400, 1310, 1220, 1200, 1180, 1(40, 1070, 1030, 1000, 960, 890, 780, 750, 730, 700. Az alabbi következő 6-8. példákban megadjuk az 1-5. példákban felhasznált kiinduló anyagok közül egy bleomicinszármazék és két aldehid előállítását. 6. példa 10 ml dimetil-formamidban 1000 mg bleomicinsav-rézkelátot és 2948 mg 1-hidroxi-benztriazolt oldunk, az oldatot 0 °C-ra hütjük, és keverés közben 1500 mg (a bleomicinsavra vonatkoztatva 10 egyenértéknyi mennyiségű) diciklohexil-karbodiimidet adagolunk. 10 perccel ezután ehhez az elegyhez 1953 mg (a bleomicinsavra vonatkoztatva 10 egyenértéknyi mennyiségű) N-(3-amino-propil)N,N-dimetil-amino-propil-amin trihidroklorid, 2206 mg (a bleomicinsavra vonatkoztatva 30 egyenértéknyi mennyiségű) N-metil-morfolin és 5 ml dimetil-formamid oldatát adjuk, és az így kapott keveréket szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük. A reakciókeverékhez annak térfogatához viszonyítva tízszeres térfogatú acetont adunk, ekkor a céltermék kicsapódik. A csapadékot alaposan átmossuk acetonnal, desztillált vízben feloldjuk és átvezetjük egy 100 ml térfogatú CM-Sephadex C-25 Na+-típusú gyantán, melyet 1/20 mólos nátrium-acetátot és ecetsavat tartalmazó, 4,5 pH értékű pufferoldattal előzőleg kiegyensúlyoztunk. A céltermék megkötődik, az adszorbeált fázist lineáris koncentrációs gradiens módszerrel eluáljuk úgy, hogy a fenti pufferoldathoz folyamatosan nátrium-kloridot adagolunk addig, amíg a nátriumklorid koncentrációja 1,0 mólra emelkedik. A körülbelül 0,45 mól nátrium-klorid koncentrációval eluált kék színű frakciókat egyesítjük, a fentebb leírt módon Amberlite® XAD-2 gyantán sómentesítjük, és liofilizáljuk. így 624 mg hozammal jutunk réztartalmú 3-[N-(3-amino-propil)-N,N-dimetilaminoj-propil-amino-bleomicinhez, mely amorf, kék por. UV abszorpciós maximum 292, illetve 243 mpnél, E (1%/1 cm) = 124, illetve 155. IR színkép (hullámszám cm“1) KBr pasztillában, abszorpciós maximumok: 3425, 2975, 2925, 1720, 5 10 15 20 25 30 3 b 40 45 50 55 60 65 13
