187835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)-N-helyettesített bleomicinek és savaddiciós sóik előállítására
terméket adszorbeálja. A sót desztillált vízzel kimossuk az oszlopból, majd az adszorbeált anyagot 1/50 n hidrogén-klorid oldat és metil-alkohol 1 : 4 térfogatarányú elegyével eluáluk, a 290 mp körül abszorpciós maximumot mutató frakciókat összegyűjtjük. Az összegyűjtött frakciókat hidroxil-típusú Dowex® 44 anioncserélő gyantával (Dow Chemical Co.) semlegesítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk és liofilizáljuk. A kapott port desztillált vízben oldjuk és nátrium-típusú CM-Sephadex® C-25 gyantával (Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött, előzetesen pH 4,5-ös 1/20 mol/1 ecetsav, nátrium-acetát pufferrel ekvilibrált oszlopon engedjük át. Az anyag a gyantán adszorbeálódik. Az adszorbeált fázist a fenti pufferhez az 1,0 mol/1 nátrium-klorid koncentráció eléréséig folyamatosan hozzáadott nátrium-kloriddal létrehozott lineáris koncentráció gradienssel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó kék színű eluátumfrakciókat összegyűjtjük, az előzőekben ismertetett módon Diaion® HP 40-nel sómentesítjük és liofilizáljuk. Réztartalmú dezamidobleomicineket nyerünk kék amorf por formájában, 70-85%-os hozammal. Ha a kiindulási anyagként alkalmazott (VI) általános képletü vegyületekben X0 jelentése —NH—X - X jelentése az előzőekben megadott - és R0 jelentése hidroxilcsoport (VIb) általános képletü amido-(N)-helyettesített bleomicinsavakat nyerünk, a képletben BM jelentése az előzőekben megadott. A vegyület előállítását a következő példában mutatjuk be. Az előzőekben ismertetett inaktiváló enzimmel az ismert bleomicin B2-t dezamidobleomicin B2-vé alakítjuk, mely vegyület a (VI) általános képletü vegyületek körébe tartozó és benne R0 helyettesítő jelentése agmantin. Ezt a dezamidobleomicint valamely (VII) általános képletü aminnal - a képletben X jelentése az előzőekben megadott - az előzőekben ismertetett módon reagáltatjuk, amido-(N)helyettesített bleomicin B2 képződik, melynek képletében R0 helyettesítő jelentése agmantin, majd a kapott vegyületet valamely ismert gomba-micéliummal, például az IFO 8502 számon deponált gomba-micéliummal (Institute for Fermentation, Osaka) hidrolizáljuk, a kívánt terméket kapjuk 70-85%-os hozammal. A (VIc) általános képletü dezamidibleomicinsav olyan, a (VI) általános képletü vegyületek körébe tartozó vegyület, melynek képletében mind X0, mind R(> jelentése hidroxilcsoport. Valamely ismert bleomicinsavból (lásd a 3 886 133. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban) az előzőekben ismertetett inaktiváló enzimmel elállítható. Ugyancsak előállítható a (Via) általános képletű dezamidobleomicin B2-ből - a képletben R jelentése agmantin - hidrolízissel az előzőekben említett gomba-sejt alkalmazásával. A hozam 70-85%. A (VII) általános képletü aminok közé tartozik például a metil-amin, etil-amin, n-propil-amin, izopropil-amin, n-butil-amin, izobutil-amin, t-butil-amin, n-pentil-amin, 3-metil-butil-amin, neopentil-amin, n-heptil-amin, 3-metil-pentil-amin, n-hexil-amin, 1,5-dimetil-hexil-amin, izohexilamin, n-oktil-amin, n-decil-amin, lauril-amin, mirisztil-amin, cetil-amin, szeatil-amin, 2-amino-etilamin, 3-amino-propil-amin, 4-amino-butil-amin, 6-amino-hexil-amin, 12-amino-dodecil-amin, 4- amino-4-metil-1 -dimetil-pentil-amin, 2,2,2-trifluoretil-amin, 2,2,2-triklór-etil-amin, 2,2-difluor-etilamin, 2,2-diklór-etil-amin, benzil-amin, difenilmetil-amin, 2-fenil-etil-amin, 2,2-difeniI-etil-amin, 1- fenil-etil-amin, 1,2-difenil-etil-amin, 3-fenilpropil-amin, 2-fenil-izopropil-amin, 1,3-difenilpropil-amin, 3,3-difenil-propil-amin, 4-fenil-butilamin, 4,4-difenil-butil-amin, klór-benzil-amin, diklór-benzil-amin, bróm-benzil-amin, p-klór-feniletil-amin, furil-metil-amin, 2-furil-etil-amin, 2-tiazolil-metil-amin, 2-piridil-metil-amin, 3-piridilmetil-amin, 4-piridil-metil-amin, indolil-metilamin, indolil-etil-amin, 4-metoxi-indoliI-metilamin, 2-piperidil-metil-amin, 3-piperidil-metilamin, 4-piperidil-metil-amin, 2-(2-piperidil)-etiI- amin, 2-(3-piperidil)-etil-amin, 2-(4-piperidil)-etilamin, l-(2-piperidil)-etil-amin, l-(3-piperidil)-etiI- amin, l-(4-piperidil)-etil-amin, 2-(piperidino)-etilamin, 2-piperazil-metil-amin, 2-(2-piperazil-etil)amin, 2-(piperidino)-etil-amin, 3-piperidino-propiI- amin, dimetil-amino-etil-amin, dietil-amino-etilamin, dipropil-amino-etil-amin, propil-amino-etilamin, dimetil-amino-propil-amin, dietil-aminopropil-amin, dipropil-amino-propil-amin, propilamino-propil-amin, dibutil-amino-propil-amin, butil-amino-propil-amin, benzil-amino-propilamin, 2-fenil-etil-amino-propil-amin, 1-fenil-etilamino-propil-amin, 3-fenil-propil-amino-propilamin, 4-fenil-butil-amino-propil-amin, metilamino-etil-amino-propil-amin, etil-amino-propilamino-propil-amin, propil-amino-propil-aminopropil-amin, butil-amino-propil-amino-propilamin, N-(butiI-amino-propil)-N-metil-aminopropil-amin, dibutil-amino-propil-ami no-propilamin, pentil-amino-propil-amino-propil-amin, etilamino-butil-ammo-propil-amin, propil-aminobutil-amino-propil-amin, etil-amino-propil-aminobutil-amin, butil-amino-propil-amino-butil-amin, benzil-amino-etil-amino-etil-amin, benzil-aminoetil-amino-propil-amin, benzil-amino-propilamino-propil-amin, benzil-amino-butil-aminopropil-amin, fenil-etil-amino-propil-amino-propilamin, N-(fenil-etil-amino-propíI)-N-metiI-aminopropil-amin, N-(klór-benzil-amino-propiI)-N- metil-amino-propil-amin, N-(bróm-benziI-aminopropil)-N-metil-amino-propiI-amín, N-(klór-feniletil-amino-propil)-N-metil-amino-propil-amin, dibenzil-amino-propil-N,N-dimetil-amino-propilamin, a-naftil-amin, ß-naftil-amin, N-benzil-4- piperidil-amin, N-fenil-etil-4-piperazinil-amin, N-benzil-3-piperazinil-amin, és az N-benzil-2- piperazinil-amin. Előnyösek azok a (VIII) általános képletü primer alifás aminok, melyeknek az aminocsoporton kívül még egy a reakcióban részt vevő bázikus csoportjuk van. Ilyen aminok például a 2-amino-etil-amin, 3-amino-propil-amin, 2-dimetiI-amino-etil-amin, 2- dietil-amino-etil-amin, 3-dimetil-amino-propilamin, 3-dietiI-amino-propiI-amin, 3-(3-butilamino-propil-amino)-propil-amin, 3-(2-hidroxipropil-amino)-propil-amin, 3-piperidino-própilamin, 3-(l-fenil-etil-amino)-propil-amin, 2-aminopropil-amin, 3-metil-amino-propiI-amin, 3-butil-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
