187808. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-(karboxi-alkil)-prolin tartalmő tripeptidek előállítására
187.808 2 \ xi-karbonil-metil)-L-prolil-DL-ß-fenil-ß-alanil-L- prolin-benzilésztert kapunk. Az utóbbi báriumhidroxiddal végzett hidrolizálása, majd kénsawal végzett savanyítás útján 0,99 g mennyiségben a 256-260 °C olvadáspontú N-(karboxi-metil)-L- prolil-DL-ß-fenil-ß-alanil-L-prolin-szulfätot kapjuk. [a]o = —43,2° (c^l, metanol és víz 1 : 1 arányú elegye). Elemzési eredmények a C2,H21N30<j • 0,25 H2 S04 • H20 képlet alapján: számított: C% = 54,83, H% = 6,46, N% = 9,13; talált: C% = 54,86, H% = 6,43, N% = 8,24. 7. példa A korábban ismertetett módon eljárva 12,5 g (0,12 mól) DL-ß-metil-ß-alanint (DL-3-aminovajsavat) 12,12 g (0,15 mól) trietil-aminnal és 32,7 g (0,15 mól) di-terc-butil-dikarbonáttal reagáltatunk 300 ml dimetil-formamidban, amikor 18,6 g (76%) mennyiségben 90-92 °C olvadáspontú fehér csapadék formájában a megfelelő t-boc származékot kapjuk. Ebből az anyagból azután 4,06 got (0,02 mól) 4,82 g (0,02 mól) prolin-benzilészterhidrokloriddal reagáltatunk a korábbiakban már ismertetett diciklohexil-karbodiimides módszerrel 25°C-on 17 órán át, amikor trifluor-ecetsavas és vízmentes hidrogén-ídoridos kezelés után DL-ßmetil-ß-alanil-L-prolin-benziteszter-hidrokloridot kapunk. Ezt az anyagot (3,5 g, 0,01 mól) ezután 1,12 g (0,005 mól) N-(metoxi-karbonil-metil)prolin-hidrokloriddal reagáltatjuk a korábbiakban ismertetett módon, N-(metoxi-karbonil-metil)-L- prolil-DL-ß-metil-ß-alanil-L-prolin-benzil6sztert kapva. Ezt azután bárium-hidroxiddal hidrolizáljuk, majd kénsavval sót képzünk. így a 135 °C olvadáspontú N-(karboxi-metil)-L-propil-DL-ßmetil-ß-alanil-L-prolin-hemiszulfätot kapjuk. {a]£ = -63,3° (c = 1%, 50%-os vizes metanol). A diasztereomer elegyet (S,S,S- és S,R,S-izomerek elegye) ezután szeparálásnak vetjük alá víz és metanol 9 : 1 térfogatarányú elegyével felvive C-18 jelzésű fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopon, eluálószerként víz, metanol és trifluor-ecetsav 90: 10:0,1 térfogatarányú elegyét használva. Bázisvonal-szeparálással (a = 1,29) az S,S,S-izomer, illetve az S,R,S-izomer egymástól elválasztható. Az első optikai forgatóképessége [alp = -59,9° (c = 1%, metanol és víz 1 : l térfogatarányú elegye), míg a másodiké Md “ “44,8° (c = 1%, metanol és víz 1 : 1 térfogatarányú elegye). 8 8. példa 10,0 g (0,0529) N-(terc-butoxi-karbonil)-D-alanin, 12,75 g (0,0529 mól) L-prolin-benzilészterhidroklorid, 14,28 g (0,0106 mól) I-hidroxi-benztriazol, 15 ml N-metil-morfolin és 125 ml vízmentes tetrahidrofurán keverékét 10,9 g (0,0529 mól) diciklohexil-karbodiimiddel és 15 ml vízmentes dimetil-formamiddal együtt a korábbiakban ismertetett módon reakcióba visszük, majd az így kapott reakcióelegyet a korábbiakban ismertetett módon feldolgozzuk, 20,4 g mennyiségbe nyers N-(tercbutoxi-karbonil)-D-alanil-L-pronn-benzi!észtert kapva. A terc-butoxi-karbonil védőcsoport korábbiakban ismertetett módon végrehajtott eltávolításakor a 140-142 °C olvadáspontú D-alanil-L- prolin-benzilészter-hidrokloridot kapjuk. Ezt az anyagot (8,3 g, 0,0265 mól) ezután a korábbiakban ismertetett módon 5,92 g (0,0265 mól) N-(metoxikarbonil-metil)-L-prolin-hidrokloriddal kondenzáljuk, 3,1 g mennyiségben szirupszerü N-(metoxikarbonil-metil)-L-propil-D-alanil-L-prolin-benzílés/tert kapva. Az utóbbi 3,0 g (6,7 millimól) bárium-hidroxidos kezelésével 2,1 g mennyiségben a 145 148 °C olvadáspontú N-(karboxi-metil)-L- prolil-D-alanil-L-prolint kapjuk. [a],2/ = -39,9° (c = 1, metanol és víz 1 : 1 arányú elegye). Hasonló módon állítható elő a 170 °C olvadáspontú (bomlik, illetve 142-145 °C-on lágyul) N-(karboxi-etil)-L-propil-L-alanil-L-prolin. [a]j,5 = -67,9° (c = 1%, metanol és víz 1 : 1 arányú elegye). 9. példa 6,28 g (0,0332 mól) N-(terc-butoxi-karbonil)-ßalanin, 5,0 g (0,0332 mól) L-prolin-amid-hidroklorid. 8,96 g (0,0664 mól) 1-hidroxi-benztriazol, 12 ml N-metil-morfolin, 75 ml tetrahidrofurán, 40 ml dimetil-formamid és 6,84 g (0,0332 mól) dicik'ohexil-karbodiimid keverékét 25 °C-on 17 órán át keverjük, majd az oldószereket vákuumban lehajtjuk és a maradékot etil-acetát és víz elegyében feloldjuk. A szerves fázist elválasztjuk, majd kis mennyiségű híg sósavoldattal, telített nátriumklorid-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és ismét telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Szárítás és bepárlás után 3,2 g mennyiségben a szirupszerü N-(terc-butoxi-karbonil)-ßalanil-L-prolin-amidot kapjuk. A kemikális ionizációs tömegspektrum adatai megegyeznek a dipeptid szerkezet alapján várt adatokkal. Fzt a terméket azután feloldjuk 35 ml vízmentes metilén-dikloridban, majd az így kapott oldatot jeges-vizes fürdőben lehűtjük és trifluor-ecetsavat adunk hozzá. A kapott oldatot 0°C-on 15 percen át, majd 25 °C-on 3 órán át keverjük és az oldószereket vákuumban 40 °C-on elpárologtatjuk. így a ß-alanil-L-prolin-amid szirupszerű trifiuor-acetátsóját kapjuk. Ezt a vegyületet (közel 0,01 mól) ez-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
