187793. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kutyák szopornyicája elleni attenuált elővírusos vakcina előállítására sejttenyészetben
5 187 793 6 nyica elleni vakcinát csirkeembriók chorioallantois membránjának oltásával, illetve feldolgozásával állítják elő. Ez a módszer rendkívül költséges és munkaigényes. 30—40 ezer adag vakcina előállításához az előbbi módszerrel mintegy 100 000 darab einbriós tojásra van szükség. Ugyanennyi adag vakcina előállításához a találmány szerinti eljárásban alkalmazott, csirkeembrió-fibroblaszt sejttenyészetben paszszált és CP hatás kíséretében szaporított vírustörzs felhasználásával, mintegy 150—200 db embriós tojásra vair szükség. A vakcina chorioallantois membránon történő előállítása esetén 1000 adag gyártásához körülbelül száz munkaórára van szükség. Csirkeembrió-fibroblaszt sejttenyészetben a találmányban leírt vírus alkalmazásával 1000 adag vakcina készítéséhez körülbelül tíz munkaóra elegendő. A találmányt az alábbi példával világítjuk meg közelebbről. Példa A sejttenyészetben előállított szopornyica vakcina (Distevac) leírása: A vírus elszaporítása 10—11 napos csirkeembrióból készített primer vagy secunder fibroblaszt tenyészeten történik. A tenyészeteket 0,07—0,08 %-os tripszines emésztéssel készítjük. A sejtek szaporítását 10% triptózfoszfát levest, 4% borjúsavót és 86% Parker 199-et tartalmazó oldatban végezzük. A Roux palackokban 24-48 órára benőtt scjtkultúrát a legalább 103 TCID5O/0,2 ml titeríí vírus (Lederle-féle avianizált szopornyica vírustörzs sejttenyészetben előállított 32. passzázsa) 15 ml mennyiségével oltjuk be. Egy óra adszorbeáltatás után a vírusmennyiséget 120—200 ml 10% triptózfoszfát levest, 2% borjúsavót és 88 % Parker 199-et tartalmazó oldattal cseréljük le. A palackokat 37 °C-on tartva, az aratás az 5.-6. napon történik, amikor a tenyészetek 80- 100 %-os cytopathogén hatást mutatnak. Az összegyűjtött vírusfolyadék sterilitását a VI. Magyar Gyógyszerkönyv előírása szerint vizsgáljuk. A steril és legalább 103 TC1DS0 titeríí szövetoltó vírustörzsanyagot műanyag ampullákban —196°C-on és liofilizálva —20 °C-on tároljuk. A vakcina termelése a szövetoltó vírustörzsanyag előállításával azonos módon történik. Az összegyűjtött virusfolyadékot 1 % zselatin, 1 % szaharóz, 0,75 % tripton és 0,5 % kollidon hozzáadásával liofilizáljuk. A liofilizált vakcina sterilitási vizsgálatát a VI. Magyar Gyógyszerkönyv előírása szerint végezzük, g A vakcina élőcsírát nem tartalmazhat. A liofilizált vakcina víruslnrialmát 7 napos előkcltetett csirkeembrió chorioallantois membránján titrálással vagy csirkeembrió-ílbroblaszt sejttenyészetben való vírusértékméréssel határozzuk meg. Megfelelő a 10 vakcina, ha legalább ÍO1^ lD5O/0,2 ml vírustartalomma! rendelkezik. A vakcina a sikeres kipróbálástól számított 6 hónapig tartható el —20 °C-on. A vakcina lejárati ideje újabb eredményes vizsgálat esetén, a titertői függően 3-6 hónappal meghosszabbítható. A vakcina ártalmatlanságát és hatékonyságát szúrópróbaszerűen állatkísérlettel is ellenőrizni kell. A gyakorlati adagra feloldott vakcinával 3 szopornyica iránt fogékony, 3 6 hónapos kutyát kell combizomba ol- 20 tani. Az oltott ebek a 21 napos megfigyelési idő alatt semmiféle betegségre utaló tünetet nem mutathatnak. A vizsgálat 21. napján a vakcinázott kutyákat lehetőleg velük azonos alomból származó 2 oltatlan kontrollal együtt 10 100 LD virulens szopornyica 2g vírussal kel! fertőzni intracerebrálisan. A 14 napos megfigyelési idő alatt a vakcinázott kutyák csak átmenetileg, enyhén betegedhetnek meg. A két kontroll állat közül az egyiknek a megfigyelési idő végéig szopornyicában el kell hullania. 30 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás szopornyica elleni attenuáll élővírusos vakcina előállítására sejttenyészetben, azzal jellemez-35 ve, hogy az Országos Közegészségügyi Intézet Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében 00221 szám alatt letétbe helyezett ML—32 jelű módosított Lederle-féle paramyxo-vírust primer vagy szekunder fibroblaszt tenyészeten 25-40 passzázson át te- 40 nyésztjük, az így kapott vírus-folyadékot oltóanyagként learatjuk, az oltóanyaggal újabb primer vagy szekunder fibroblaszt-szövettenyészeteket oltunk be, a tenyészeteket 4 9 napon át inkubáljuk, majd a vírusfolyadékot elkülönítjük és védőkolloid hozzáadása 45 után liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy védőkolloidként zselatin, szacharóz, tripton és kollidon keverékének a vírusfolyadékra vonatkoztatva 2-5 %-át alkalmazzuk. cn rajz nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent: a Műszaki Könyvkiadó gondozásában COPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
