187773. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyeettesített imidazol-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
5 187 773 6 védőcsoport típusától függően végezhetjük. így például egy díalkoxi-metilcsoportot savas hidrolízissel, míg egy benzilcsoportot cseppfolyós ammóniában rémnátriummal végzett kezelés útján távolítunk cl. Az e) eljárás végrehajtása során Lcwis-savként például titán-tetrakloridot, alumínium-kloridot vagy cink - kloridot használunk. Oldószerként például metilén-klorid vagy kloroform alkalmazható. A reagáltatást előnyösen a rcaktánsok clcgyénck szobahőmérsékleten 6-12 órán át végzett keverésével hajtjuk végre. A g) eljárás végrehajtása során a (L1V) általános képletű vegyületek és az R3-MgHal általános képletű Grignard-reagensek reagáltatását célszerűen tetrahidrofurán és toluol elegyében, visszafolyató hűtő alkalmazásával végzett forralás közben végezzük. Miként korábban már említettük, a találmány szerinti eljárással előállított (I) áltaános képletű vegyiilctek, továbbá gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik kiváló magas vérnyomást csökkentő hatásúak. Kísérleteink szerint ugyanakkor ezek a vegyületek más gyógyászati hatást is kifejtenek, így például antitrombikus aktivitást mutatnak. Találtunk ugyanakkor antimikotikus és antifungális aktivitást is. Valamely (I) általános képletű izomer vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sója vagy ilyen vegyületek keverékének beadása történhet parenterálisan, intravénásán vagy orálisan. Jellegzetesen a beadás olyan gyógyászati készítmény formájában, amely a hatásos mennyiségben vett hatóanyagon túlmenően a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokat tartalmaz. Hatásos mennyiség alatt azt a mennyiséget értjük, amely a kívánt gyógyászati hatást fejti ki káros mellékhatás nélkül. A konkrét esetben alkalmazott hatóanyag mennyisége számos tényezőtől, például a beadás módjától, az emlős fajától, a kezelendő tünettől és természetesen magának a hatóanyagnak a szerkezetétől függ. A jellegzetesen alkalmazható gyógyászati készítmények szilárd vagy folyékony halmazállapotúak lehetnek. A konkrét esetben alkalmazott gyógyászati készítményt a tervezett beadási módtól függően választjuk meg. így például szilárd hordozóanyagként laktózt, szacharózt, zselatint vagy agar-agart, míg folyékony hordozóanyagként például vizet, cukorszirupot, földimogyoróolajat vagy olívaolajat használhatunk. Az egyéb használatos hordozó- és segédanyagok szakember számára jól ismertek. A gyógyászati készítmények elkészíthetők például tabletták, kapszulák, kúpok, oldatok, emulziók és porok formájában. A találmány szerinti eljárással előállítható imidazol-származékok magas vérnyomást csökkentő hatását a következő kísérleti módszerrel határozhatjuk meg. Normális súlyú Sprague-Dawley patkányokat először uretánnal elaltatunk, majd femorális vénájukat egy polietilénese segítségével összekapcsoljuk egy vernyomásregisztráló berendezéssel. A kísérleti anyagot ezután a femorális vénába injektáljuk vagy intraperitoneálisan adagoljuk, miközben a vérnyomást és a pulzusszámot regisztráljuk és rögzítjük. A magas vérnyomást csökkentő hatás vizsgálatára szolgáló egy másik módszer értelmében nem altatott Vistar spontán magas vérnyomású patkányokat (SHR) használunk kísérleti állatként. A kísérleti ve-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 gyületet perorálisan egy csövön át a gyomorba adagoljuk. A vérnyomást a faroknál mérjük közvetett, vér nélküli módszerrel. A diurclikus aktivitást patkányoknál mérjük úgy, hogy a kísérleti vegyület injektálását követő 0-5. órában mérjük a vizeletkibocsátást. A kísérletet megelőzően az állatokat egy éjszakán át éheztetjük, majd az injektálást megelőzően orálisan 10 ml vizet adagolunk nekik. Az antilrombotikus aktivitást in vitro vizsgáljuk. A kísérleti vegyülcleknek a trombociták ADP és kollagén által kiváltott aggregálódására kifejtett gátló hatását mérjük. A kísérletben tehénvérből származó trombocitákat használunk. 1,2 ml, 250 000 trombocita/mm1 koncentrációjú plazmához a vizsgálni kívánt vegyület oldatából 50p!-t adunk. 10 perces inkubálást követően AOP-t vagy kollagént adagolunk. A trombociták aggrcgálódásál turbidimclriásan X — 605 nm-nél határozzuk meg. Az antimikrobiális aktivitást in vitro olyan kvalitatív, antibakteriális és antifungális hatás megállapítására szolgáló vizsgálatban határozzuk meg, amelynél az úgynevezett agar diffúziós módszert hasznosítjuk a Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Proteus mirabilis. Pseudomonas aeruginosus, Candida albicans és Aspergillus niger törzsek esetén. Az antifungális aktivitást in vitro a következő törzsekkel szemben vizsgáljuk: Trichophyton rubrum, Trichophyton metagrophytis, Microsporum canis, Epidermophyton floccosum, Chrysosporum, Candida albicans, Candida guilliermondi és Saccaromyces cerevisiae. A gombatörzseket agar-agar táptalajon lemezes tenyésztésnek vetjük alá. A kísérleti vegyületet az inkubálást megelőzően adagoljuk. A Idsérleti vegyület hatékonyságának mértéke annak a körnek a sugara, amelyben a gombanövekedés gátlást szenved. Az akut toxieitást NMRI-törzsbeli, közel 7 hónapos és 30-40 g súlyú nőstény egereket használva állapítjuk meg, a kísérleti vegyületet intravénásán beadva. A 4-(alfa,2,6 - trimetil - benzil) - imidazol (LDjj = 150 mg/kg intravénásán egereknél) 30 perccel 1-10 mg/kg dózisban intravénásán történő beadása után a vérnyomást 30 %-kal csökkenti. A 4 - (alfa, 2,3, - trimetil - benzil) - imidazol (LDS® = 40 mg/kg intravénásán egereknél) 30 perccel 10 pg/kg dózisban intravénásán történő beadása után a vérnyomást 55 %-kal csökkenti. 1 mg/kg dózisban perorálisan beadva 20 %-os vérnyomáscsökkenést eredményez. Hatása legalább 5 órán át tart. A 4 - (alfa. 2 - dimetil - benzil) - imidazol (LDj0 = 100 mg/kg intravénásán egereknél) a beadás után 30 perccel 0,3 mg/kg intraperitoneális dózisban a vérnyomást 20 %-kal csökkenti. A 4 - (alfa - metil - 2 - klór - benzil) - imidazol (LDS0 = 140 mg/kg intravénásán egereknél) a beadás után 30 perccel 10 mg/kg intravénás dózisban mintegy 20 %-kal csökkenti a vérnyomást. A 4 - (alfa - etil - 2,3 - dimetil - benzil) - imidazol (LD50 = 40 mg/kg intravénásán egereknél) 30 perccel a beadás után I mg/kg intravénás dózisban a vérnyomást 40 %-kal csökkenti. 4
