187709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás maláriaellenes antigén preparátum és vakcina előállítására
1 187 709 2 csonyabb molekulasúlyú sávok felé. A 42. órában a radioaktivitás a 195 000-es molekulasúly sávba inkorporálódott a radioaktív jelölés periódusa alatt, de a 60 perces lecserélés után az 1,53 x és az 1,50 x 105 molekulasúlyú sáv kifejezettebben volt és megjelent a 0,83 x 105-es sáv is. A 120 perces lecserélés után a 0,83-as molekulasúlyú sáv intenzitása növekedett, és a jelölőanyag egy része a 0,6 x 105 molekulasúlyú polipeptidhez kapcsolódott. A parazita fejlődés 45 órás periódusa után a 195 000 molekulasúlyú fehérje diszkrét töredékekre történő szétesése sokkal kifejezettebb volt a lecserélési periódus alatt. (A 48. óránál az immunprecipitátum azt jelezte, hogy bizonyos menynyiségü 195 000-es molekulasúlyú fehérje 60 000-es molekulasúlyú töredékekre történő szétbomlása már a 30 perces pulzus periódus alatt bekövetkezik.) A folyamat megindulása együttjárt az új gyűrű formáknak a megjelenésével a kultúrában, és így a schizonták érésével, illetve a fertőző merozoitok felszabadulásával is. 10. példa: A Plasmodium falc iparúmhoz kapcsolódó antigén elhelyezkedésének meghatározása, és a Plasmodium yoelii antigénnel szembeni többértékű szérummal való kereszt-reakciója Indirekt immunfluoreszcencia segítségével, aceton-fixált sejteket felhasználva megállapítottuk, hogy a fehérje a schizonta és a merozoit-membránhoz kapcsolódik, és az eloszlása azonos a 4. példában leírt antigénnel. A Plasmodium yoelii és a Plasmodium falciparum antigénjei között immunológiai kereszt-reakciót úgy demonstráltuk, hogy egerekben nagy koncentrációjú, többértékü antiszérumot képeztünk Plasmodium yoelii antigénhez, melyet a 2. példában leirt módon készítettünk. Ha ezt az antiszérumot Plasmodium falciparummal fertőzött emberi vörösvértestekkel szemben megvizsgáltuk, azonos elszínezödési mintát kaptunk mint amikor 89,1 antitestet használtunk 1 : 1600 IIF titer mellett. Ez immunológiai keresztreakciót jelez a két antigén között, ami valószínűleg a szerkezetük közötti hasonlóságnak köszönhető. 11. példa Vakcinák előállítása Az immunizáláshoz használható vakcinákat a szokásos módszerekkel készíthetjük el a következő összetételben : A összetétel B összetétel antigén 2 mg Antigén 1 mg fiziológiás sóoldat Al-hidrogél 1 mg Fiziológiás sóoldat 1 ml Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Plasmodium nemzetségbeli paraziták elleni védelmet kiváltó fehérjeszerű antigének és ezek immunválasz kiváltására képes származékainak előállítására, amelyek- látszólagos molekulasúlya 1,8 x 105 - 2,5 x 105 tartományba esik,- a parazita erythrocytában levő schizontaforma membránjához kapcsolódnak,- az erythrocytákon belül azonos antigén-tulajdonságú diszkrét töredékké alakulnak és amelyekben az antigén vagy annak diszkrét töredékei a merozoit felületi membránjához kapcsolódnak, azzal jellemezve, hogy (I) szolubilizáljuk à Plasmodium paraziták schizonta formáját tartalmazó erythrocytákat; (II) az így kapott anyagot érintkezésbe hozzuk a kívánt antigén fehérjére specifikus monoklón antitestekkel, és így egy antitest-antigén komplexet alakítunk ki; (III) a kapott antitest-antigén komplexből kivonjuk az antigént. Elsőbbség: 1981. augusztus 3. 2. Eljárás Plasmodium nemzetségbeli paraziták elleni védelmet kiváltó fehérjeszerű antigének és ezek immunválasz kiváltására képes származékainak előállítására, amelyek- látszólagos molekulasúlya 2,1 x 105 - 2,5 x 105 tartományba esik,- a parazita erythrocytában levő schizontaforma membránjához kapcsolódnak,- az erythrocytákon belül azonos antigén-tulajdonságú diszkrét töredékké alakulnak, és amelyekben az antigén vagy annak diszkrét töredékei a merozoit felületi mebránjához kapcsolódnak, azzal jellemezve, hogy (I) szolubilizáljuk a Plasmodium paraziták schizonta formáját tartalmazó erythrocytákat; (II) az így kapott anyagot érintkezésbe hozzuk a kívánt antigén fehérjére specifikus monoklón antitestekkel, és így egy antitest-antigén komplexet alakítunk ki; (III) a kapott antitest-antigén komplexből kivonjuk az antigént. Elsőbbség: 1981. május 21. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az 1,90 x 105 - 2,30 x 105 molekulasúlyú antigént izoláljuk. Elsőbbség: 1981. augusztus 3. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy humán Plasmodium parazita elleni antigént állítunk elő. Elsőbbség: 1981. augusztus 3. 5. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy humán Plasmodium parazita elleni antigént állítunk elő. Elsőbbség: 1981. május 21. 6. Az 1., 3., 4. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az 1,95 x 105 molekulasúlyú antigént állítjuk elő. Elsőbbség: 1981. augusztus 3. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
