187495. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vérplazma VIII. faktorának stabilizálására és kinyerésének fokozására.
1 187 495 2 2. Táblázat VIII. kinyerése friss és + 4 °C-on tárolt plazmákból Tárolás időtartama (óra) _______________________0 12 24 48 Kezeletlen kontroir összes VIII. faktor Egység plazmában 240 180 180 120 Kinyert VIII. faktor Egység 120 100 100 70 Kinyerés % 50 555555 Tárolt plazma feldolgozás előtt kalciummal kezelve^ összes VIII. faktor Egység plazmában 240 160 160 120 Kinyert VIII. faktor Egység 210 120 120 100 Kinyerés % 87 75 75 80 + : 5 kísérlet átlaga 28 vérvételből ■*"*: 5 kísérlet átlaga 20 vérvételből A VIII. faktor aktivitást a Haemostasis 7, 1 (1978)-ban leírt módszer szerint határoztuk meg. A kalciumglükonátot a plazma térfogatára számítottan 0,14 s%-nyi mennyiségben alkalmaztuk. A találmányunk szerinti eljárás előnyei az ismertetett módszerekkel szemben a következőkben öszszegezhetők: A CPD véralvadásgátlóba vett vérből nyert plazma VIII. faktorának eljárásunk szerinti + 4 °C-on történő stabilizálása egyrészt megoldja a vérplazma gyűjtését és nagyobb adagokban történő lefagyasztását a feldolgozás helyén, másrészt a VIII. faktor kinyerése a plazmából a mélyfagyasztás előtt történő, eljárásunk szerinti kalcium-só adagolással az eddig ismert eljárások átlagosan 40%-os kinyerésével szemben 72-90 %-os kitermelést biztosít, a termelékenység több mint kétszeresére nő, miközben az általunk alkalmazott kezelés nem befolyásolja az alakos elemek konzerválásának optimális körülményeit, a kezelt VIII. faktor mentesített plazma az eddig általánosan elterjedt és jól bevált frakcionálási eljárásokra alkalmas. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban ismertetett leírásokban mutatjuk be részletesen, anélkül, hogy találmányunkat ezekre korlátoznánk. /. példa CPD stabiiizátorba, műanyag zsákba vett 400 ml vért a vérvételt követően 4-6 órán belül + 4 °C-on 1330 g-vel 30 percig centrifugáltunk. A vörösvérsejt koncentrátumtól elválasztott 220 ml 1,1 E/ml VIII. faktor aktivitású plazmához 4,0 ml 10%-os kalciumglükonát vizes oldatát adtuk keverés mellett, majd a kezelt plazmát - 30 °C-on lefagyasztottuk. A fagyasztott plazmát 14 órán át +4 °C-on állni hagytuk, a kivált csapadékot 0 °C-on 20 percig 1330 g-n centrifugáltuk, a felülúszó plazmát a centrifugálás után eltávolítottuk, a csapadékot 22 ml 7,0 pH-jú, 0,058 mól nátriumkloridot és 0,021 mól nátriumcitrátot tartalmazó vizes oldatba vettük fel, majd elvégeztük az aktivitásmérést: 8 E/ml értéket kaptunk. A kitermelés 83% volt. 2. példa CPD stabiiizátorba, műanyag zsákba vett 400 ml vért a vérvételt követően 5 óra múlva +4 °C-on 1330 g-vel 30 percig centrifugáltunk. A vörösvérsejt koncentrátumtól elválasztott 220 ml, 1,1 E/ml VIII. faktor aktivitású plazmához 2,5 ml 10%-os kalcium glükonát vizes oldatát adtuk keverés mellett, majd a kezelt plazmát -30 °C-on lefagyasztottuk. A fagyasztott plazmát 14 órán át +4 °C-on állni hagytuk, a kivált csapadékot 0 °C-on 20 percig 1330 g-n centrifugáltuk. A felül úszó plazmát a centrifugálás után eltávolítottuk, a csapadékot 22 ml 7,0 pH-jú 0,058 mól nátriumkloridot és 0,021 mól nátriumcitrátot tartalmazó vizes oldatba vettük fel, majd elvégeztük az aktivitás mérést: 7 E/ml értéket kaptunk. A kitermelés 72% volt. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás vérplazma VIII. faktorának stabilizálására és kinyerésének fokozására steril körülmények között zárt rendszerben citrátos antikoagulánssal +4 °C-on kezelt vér centrifugálásával nyert plazmából azzal jellemezve, hogy a plazma kalcium ion koncentrációját kalcium-só, előnyösen kalciumglükonát adagolásával keverés mellett 2,5-4,5 mMól értékre állítjuk be, majd - 30 °C-on gyorsfagyasztjuk, ezt követően +4 °C-on 14-16 óra alatt felolvasztjuk, a kivált VIII. faktort centrifugálással a plazmától elválasztjuk, és - adott esetben feloldva- mélyfagyasztva tároljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja azzal jellemezve, hogy a kalciumsót előnyösen a citrátos vér centrifugálása után közvetlenül adagoljuk a plazmához. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja azzal jellemezve, hogy a plazma kalcium-ion koncentrációját 4,0 mMól értékre állítjuk be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Ábra nélkül
