187388. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és preparátum agyi receptorokhoz kötődő anyagok mennyiségi meghatározására és eljárás a preparátum előállítására

1

187 388

2

2. táblázat

A példa száma

Specifikusan kötött 3H-ligandum fmól/ml

3.1.

111

3.2.

231

3.3.

22

3.4.

19

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás agyi receptorokhoz kötődő anyagok mennyiségi meghatározására alkalmas, stabil re- 15 ceptor preparátum előállítására, amelynek során vízben oldódó inert anyag vizes oldatával készített agy- vagy agyrészlet homogenizátumot 800-1100 g gyorsuláson 8-20 percig centrifugálunk, a felülúszót 18 000-22 000 g gyorsuláson 10-20 percig 20 végzett centrifugálással ülepítjük, az így kapott szilárd anyagot desztillált vízben újrahomogenizáljuk, ezután 7000-9000 g gyorsuláson 5-15 percig centrifugáljuk, a felülúszót elkülönítjük és 35 000-45 000 g gyorsuláson 20-30 percig végzett centrifugálással 25 elkülönítjük a preparátum alapanyagát, azzal jellemezve, hogy ezt az alapanyagot 6 és 8 közötti pH- értékű vizes pufferoldattal háromszor mossuk, majd a szilárd anyagból és mosófolyadékból álló szuszpenziót - 10 és - 30 °C közötti hőmérsékleten 30 legalább 8 órán át fagyasztjuk, felengedjük, felengedés után 35 000-45 000 g gyorsuláson 20-30 percig centrifugáljuk, ezt a fagyasztás-felengedés-centrifugálásból álló ciklust előnyösen még kétszer ismételjük, végül a szuszpenziót fagyasztás után vákuumban szárítjuk.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mosáshoz trisz-citrát pufferoldatot (pH = 7,1) használunk fel.

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez-5 ve , hogy a fagyasztást - 15 és -25 °C, célszerűen- 20 °C hőmérékleten 10 órán keresztül folytatjuk.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a felengedés utáni centrifugálást 38 000-42 000, célszerűen 40 000 g gyorsuláson végezzük.

5. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerint előállított, 4 °C-on 1 évig, szobahőmérsékleten 1 hónapig tárolható receptor preparátum, azzal jellemezve, hogy fehér szinű, száraz, porszerű anyag, melynek szabad víztartalma 0,5-5%; desztillált vízben vagy pufferoldatban szuszpendálható, szuszpendálási arány: 2 mg/ml-6 mg/ml; a nyert szuszpenzió áttetsző és nem ülepszik (stabilis); a preparátum fehérjetartalma 15—25%; a preparátum y-aminovajsav tartalma kevesebb, mint 20 pmol/g preparátum.

6. Eljárás agyi receptorokhoz kötődő anyagok mennyiségi meghatározására az agyi receptorokhoz specifikusan kötődő radioaktív ligandumok segítségével, melyek kött mennyiségét a mérendő anyag koncentrációtól függő mértékben csökkenti, azzal jellemezve, hogy a tesztben receptor preparátumként az 1-5. igénypontok bármelyike szerint előállított anyagot használjuk fel.

7. Eljárás gerincfolyadékban levő y-aminovajsav-koncentrációjának meghatározására a receptorhoz specifikusan kötött 3H-y-amino-vajsav mennyiségének a gerincfolyadék hatására bekövetkező csökkenése alapján, azzal jellemezve, hogy a vizsgálathoz receptor preparátumként az 1-5. igénypontok bármelyike szerint előállított anyagot használjuk fel.

Ábra nélkül