187153. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immobilizált glükoamiláz enzim-készítmény előállítására
1 187 153 . 2 pH-ját 7,5-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órán át kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t„ és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése. 5 után a gélt szűréssel elválasztottuk, és háromszor 50 ml 0,1 mólos kálium-foszfát oldattal (pH 7,5), háromszor 50 ml 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos kálium-foszfát oldattal (pH- 7,5), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos kálium-foszfát 10 oldattal (pH- 7,5) mostuk. Végül a gélt desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,75 g immobilizált glükoamiláz. Aktivitás: 13,5 g glükóz felszabadítása/óra/g xerogél. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás immobilizált glükoamiláz enzimkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy 20 a) 4,5-9 pH értékű puflfer-oldatban szuszpendált és duzzasztott N-aminometil-akrilamid és/vagy N-aminometil-metakrilamid, vagy akrilamid és/ vagy metakrilamid monomerekből akril- vagy alliltípusú térhálósítószerrel felépített, legalább 1,0 mekv/g—NH2 funkciós csoportot tartalmazó polimerre felvisszük a vízben vagy 0 °C alatti hőmérsékleten szerves oldószerben oldható karbodiimid vegyülettel kezelt glükoamilázt, vagy a duzzasztott gélhez hozzákeverjük a glükoamiláz oldatát és az 30 így kialakított adszorpciós komplexhez adva a karbodiimid vegyületet, biztosítjuk a glükoamiláz karboxilcsoportjainak irányított aktiválását, majd az elegyet 0-4 °C-on 24-72, célszerűen 48 órán keresztül keverjük, ezt követően a gélt kiszűrjük, több- 35 szőr 4,5-9 pH értékű puffer-oldattal, végül vízzel mossuk és adott esetben liofilezzük, vagy b) 4,5-9 pH értékű puflfer-oldatban szuszpendált és duzzasztott akrilsav és/vagy metakrilsav, vagy akrilamid és/vagy metakrilamid monomerekből akril- vagy allil-típusú térhálósítószerrel felépített, legalább 1,0 mekv/g —COOH funkciós csoportot tartalmazó polimert vízben vagy 0 °C alatti hőmérsékleten szerves oldószerben oldható karbodiimid vegyülettel kezelünk, és az így aktivált hordozóra 4,5-9 pH értékű oldatból glükoamiláz enzimet viszünk fel 0-4 °C hőmérsékleten, 24-72, célszerűen 48 óra alatt, majd a gélt kiszűrjük, többször vizes puffer-oldattal, végül pedig vízzel mossuk, majd adott esetben liofilezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy —NH2 funkciós csoportot tartalmazó polimerként olyan akrilamid- N,N'-metilén-bisz-akrilamid-N-amino-metil-akrilamid kopolimereket használunk, melyeknek kizárási molekulasúly-határa legalább 100 000 dalton. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy —COOH funkciós csoportot tartalmazó polimerként olyan akrilamid- N.N'-metilén-bisz-akrilamid-akrilsav kopolimereket használunk, melyeknek kizárási molekulasúlyhatára legalább 100 000 dalton. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy aktiváló karbodiimidként N-ciklohexil-N'-[2-(4- morfolinil)-etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot vagy N-etil-N'-(3-dimetil-amino-propil)karbodiimíd-hidrokloridot használunk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerint eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy reakcióközegként vizes puffer-oldatot, célszerűen 0,1 mólos kálium-foszfát vagy nátrium-acetát oldatot használunk. 25 Ábra nélkül 7
