187153. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immobilizált glükoamiláz enzim-készítmény előállítására
187 153 2 0,5 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát pufferben (pH 5,0) szuszpendáltunk, majd jeges vízfürdőn, állandó kevertetés mellett hozzáadtunk 1 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)eti l]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot. 10 perc további keverés után a reakcióelegyhez 1,7 ml glükoamiláz oldatot (117,7 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 5,0-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt szűréssel elválasztottuk és háromszor 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH 5,0), háromszor 50 ml - 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó - 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH 5,0), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos nátriumacetát pufferrel (pH 5,0) mostuk. Végül a gélt desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk Kitermelés: 0,7 g immobilizált glükoamiláz. Aktivitás: 0,75 g glükóz felszabadítása/óra/g xerogél. 5. példa 6. példa 0,5 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát pufferben (pH 6,0) szuszpendáltunk, majd jeges vízfürdőn, állandó kevertetés mellett hozzáadtunk 1 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolini!)etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot. 10 perc további kevertetés után a reakcióelegyhez 1,7 ml glükoamiláz oldatot (117,7 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 6,0-ra állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt szűréssel elválasztottuk és háromszor 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH 6,0), háromszor 50 ml - 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó - 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH 6,0), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos nátriumacetát pufferrel (pH 6,0) mostuk. Végül a gélt desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,7 g immobilizált glükoamiláz. Aktivitás: 1,35 g glükóz felszabaditása/óra/g xerogél. 7. példa 0,5 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldatban (pH 7,0) szuszpendáltunk, majd jeges vízfürdőn, állandó kevertetés mellett hozzáadtunk 1 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfoliniI)etilj-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot. 10 perc további kevertetés után a reakcióelegyhez 1,7 ml glükoamiláz oldatot (117,7 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 7,0-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt szűréssel elválasztottuk és háromszor 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 7,0), háromszor 50 ml - 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó - 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 7,0), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos nátriumacetát oldattal (pH 7,0) mostuk. Végül a gélt desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,6 g immobilizált glükoamiláz. Aktivitás: 3,0 g glükóz felszabadítása/óra/g xerogél. 8. példa 0,5 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldatban (pH 7,5) szuszpendáltunk, majd jeges vízfürdőn, állandó keverés mellett hozzáadtunk 1 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfoIinil)etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot. 10 perc további keverés után a reakcióelegyhez 1,7 ml glükoamiláz oldatot (117,7 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 7,5-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt szűréssel elválasztottuk és háromszor 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 7,5), háromszor 50 ml - 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó - 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 7,5), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos nátriumacetát oldattal (pH 7,5) mostuk. Végül a gélt desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,75 g immobilizált glükoamiláz. Aktivitás: 5,7 g glükóz felszabadítása/óra/g xerogél. 9. példa 0,5 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldatban (pH 8,0) szuszpendáltunk, majd jeges vízfürdőn, állandó kevertetés közben hozzáadtunk 1 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)etiI]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot. 10 perc további kevertetés után a reakcióelegyhez 1,7 ml glükoamiláz oldatot (117,7 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 8,0-ra állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt szűréssel elválasztottuk és háromszor 50 ml 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 8,0), háromszor 50 ml - 1 mól nátrium-kloridot tartalmazó - 0,1 mólos nátrium-acetát oldattal (pH 8,0), majd háromszor 50 ml 0,1 mólos nátriumacetát oldattal (pH 8,0) mostuk. Végül a gélt desz( 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
