186928. lajstromszámú szabadalom • Immunokémiai reagens-készítmény
9 186928 10 alkalmazó) módszerrel, amely nem bizonyult reprodukálhatónak, nem adott értékelhető adatokat. 3. példa Nyúl vagy kecske anti-humart fibrinogén F (ab1)! antitestet feloldunk 0,1 M Trisz-maleinsavas pufferoldatban (pH = 8,6) és ugyanezen pufferoldatban szuszpendált látex részecskéket (átmérő: 0,220 pm, gyártó: Dow Chemical) úgy szenzibilizálunk az eredő oldatban, hogy a kapott reagenskészítmény szenzibilizáltsága a 100 ng/ml nagyságrendjében legyen. A részecskéket ezután marhaszérumalbuminnal kezeljük és 0,1% nátrium-azidot tartalmazó vizes oldatban szuszpendáljuk, melynek vezetőképessége 1.0 mS/cm. Alkalmazáskor a reagens-készítményt 0,1 M Trisz-maleinsavas pufferoldattal (pH = 8,4) vagy Trisz-sósavas pufferoldattal (pH = 8,4) hígítjuk a kívánt látex koncentrációra és üveglemezen reagáltathatjuk vagy optikai meghatározás reagenseként is alkalmazhatjuk úgy ahogy van, hígítás nélkül. Az ezen reagens alkalmazásával üveglemezen végbemenő reakció során az agglutináció mintázata és a nem agglutinált rész mintázata tisztán megkülönböztethető. 4. példa Humán IgG-vel szemben hatásos kecske antitest globulint feloldunk 0,1 M Trisz-maleinsavas pufferoldatban (pH = 8,8). Az oldathoz keverünk - ugyanilyen pufferoldattal hígított - látex részecskéket (átmérő: 0,312 pm, gyártó: Dow Chemical). Az így szenzibilizált részecskéket ezután - látex részecskénként 500-1000 molekulányi - marhaszérumalbuminnal kezeljük, végül Trisz-maleinsavas pufferoldatban szuszpendál juk, amelynek vezetőképessége mintegy 3.0 mS/cm. Alkalmazása során a szuszpenziót 0,1 M Trisz-maleinsavas pufferoldattal vagy Trisz-sósavas pufferoldattal hígítjuk, esetleg külön hígítás nélkül is alkalmazhatjuk . 5. példa Nyúl IgA anti-humán F (ab')s antitestet 0,2 M borátos pufferoldatban (pH = 8,3) feloldunk és az oldatot a 4. példánál leírt módon kezeljük a kívánt reagens-készítmény szuszpenziókénti előállítása céljából azzal az eltéréssel, hogy a vizes közeg, melyben végül szuszpendáljuk a szenzibilizált részecskéket 0,5 és 0,8 mS/cm közötti vezetőképességű . 6. példa Nagytisztaságú nyúl IgM anti-humán antitesttel szenzibilizálunk látex részecskéket glicines pufferoldatban (pH = 9,6). A menynyiségi arányok az antitest minőségétől és a kívánt szenzibilizáltság értékétől függően változók. Miután a szenzibilizált részecskéket - látex részecskénként 7000- 14000 molekulányi - marhaszérumalbuminnal kezeltük, azokat 0,1 M glicines pufferoldatban szuszpendáljuk, melynek vezetőképessége 1,2 mS/cm körüli és amely tartalmazhat mintegy 0,05%-nyi marhaszérumalbumint, így kapjuk a kívánt reagens-készítményt . 7. példa Nagytisztaságú nyúl anti-hCG F (ab')j antitestet feloldunk 0,2 M Trisz-sósavas pufferoldatban (pH = 8,6) és a kapott oldattal szenzibilizálunk látex részecskéket (átmérő: 0,220 pm, gyártó: Dow Chemical), melyeket szobahőmérsékleten szuszpendálunk az oldatba. Látex részecskénként 10000- 20000 molekulányi marhaszérumalbuminnal való kezelés után a szenzibilizált részecskéket 0,1 M glicines pufferoldatban szuszpendál juk, amelynek vezetőképessége mintegy 0,8 mS/cm, majd a készítményt tároljuk. A fentiekben adott részletes ismertetés után szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmányi gondolattal összhangban a fenti példákban megadottól eltérő összetételű reagens-készítmény is előállítható a példákban megadottól eltérő szerek alkalmazásával . 1. táblázat: A kísérletsorozatban kapott érték Szérum minta ng/ml No. 1 2 3 (45.0)* (195.6)* (950.0)* 1 45.2 189.2 906.2 2 41.3 190.5 917.5 3 42.0 195.8 887.5 4 44.5 181.1 901.3 5 44.6 190.5 906.3 6 43.6 189.7 937.1 7 42.5 190.1 885.0 8 42.0 184.5 918.0 9 38.9 180.5 913.5 10 38.6 184.2 925.3 11 40.2 185.6 921.0 12 39.7 190.1 887.2 Átlagérték 41.9 187.7 908.8 Szórás 2.26 4.49 16.4 Variancia tényező % 5.4 2.4 1.8 * A zárójelben megadott értékek a rádióimmunológiai meghatározással kapott értékek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 eo 65 6
