186839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás újszülött borjúban, csikóban vagy tehén vagy kanca kolosztrumában jelenlévő IGG mennyiségének meghatározására
1 186839 2 alaposan elkevertük (így a minta 0,01 térfogatrésze jutott 16 térfogatrész pufferoldatra). A hígított latexkeverék minden egyes cseppje 0,025 mí-t tartalmazott; a hígított latex féle cseppje 0,10 ml-t tartalmazott. Két csepp hígított latexkeveréket tárgylemezre helyeztünk, egy csepp fenti módon hígított csikó-szérumot adtunk hozzá, és átkevertük. A tárgylemezt enyhén megforgattuk, és megfigyeltük az agglutináció jelentkezését a keverékben. Ha 10 másodperc múlva látható és jelentős agglutináció nem volt megfigyelhető, akkor további 1 csepp hígított szérumot adtunk hozzá, és a fentebb említett módon átkevertük. Ezt a titrálást addig folytattuk, amíg az agglutináció bekövetkezett. Ezt az eljárásmódot minden egyes, hígított csikó-szérumminta esetében megismételtük. Az így kapott IgG-agglutinációs vizsgálatok eredményét összehasonlítottuk a kontrolleljárás során kapott IgG vizsgálati eredményekkel. A vizsgálati eredményeket az 1. táblázatban foglaltuk össze. I. táblázat RID méréssel kapott IgG- koncentrációk Vizsgáló módszer — a hozzáadott szérum mennyisége >400 mg/dl 1 csepp hígított szérum 2 csepp hígított latexhez: az agglutináció pozitív £400 mg/dl 2 csepp: az agglutináció pozitív 200-400 mg/dl 3 csepp: az agglutináció pozitív £200 mg/dl 4 csepp: az agglutináció pozitív <200 mg/dl >4 csepp: az agglutináció pozitív Az 1. táblázatban foglalt kritériumok alkalmazása mellett a találmányi eljárás szerint 77 csikó-szérummintából álló sorozatot vizsgáltunk, és összehasonlítottuk a RID-kontrolleljárás során megállapított IgG- koncentrációkkal. Eredményeinket a 2. táblázatban összegeztük. Összesen 77 vizsgált minta közül 73 minta (94,8%) esetében a kapott értékek összhangban voltak a RID- kontrolleljárás során kapott IgG-koncentrációkkal. Azonos eredményeket kaptunk akkor is, ha ennek a 5 vizsgálati eljárásnak a pontosságát az Eq. Vet. 6. 109 (1974) irodalmi helyen leírt cink-szulfát vizsgálattal hasonlítottuk össze. Ezek a vizsgálati eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti eljárás segítségével az IgG-koncent- 10 rációk egy elismert, gyakorlatban végrehajtott vizsgálattal összehasonlítva igen nagy pontossággal meghatározhatók. Az alkalmazott, speciális reakciófeltételek melleit — azaz, ha a latexrészecskék mérete 0,22 pm, és a !a- 15 texoldat koncentrációja 2,0 súly/térf.-%, továbbá a testfolyadék térfogatrészeinek a pufferoldat térfogatrészeihez viszonyított aránya 0,01:16 — az IgG-k.oncentrációk egyszerű módon, a hígított testfolyadék 4— 5 csepig terjedő mennyiségének felhasználásával w meghatározható. 2. példa 25 Két csikóból szérummintát vettünk, és RID-vizsgálattal megállapítottuk, hogy az lgG-koncentráció körülbelül 1500 mg/dl, illetve körülbelül 0—200 mg/dl. A mintákat úgy elegyítettük, hogy a következő IgG- koncentrációk (mg/dl) szerinti sorozatot kapjuk: 750, 30 500, 373, 300, 250 és 166. Ezeket a szérummintákat az alábbi módon használtuk fel. 10 súly/térf.-%-os, 0,22 pm részecskeméretű polisztirol-latexet 0,2 mólos, 8,5 pH-értékű N,N-bisz(2- -hidroxi-etil)-glicin pufferoldattal 1:5 térfogatarányban elegyítve körülbelül 2 súly/térf.-% végkoncentrációra hígítottunk. Minden egyes vizsgálat céljára 5 p\ fentebb megadott koncentrációjú csikó-szérumot 6 ml fenti pufferoldathoz adtunk, és így alapos átkeveréssel olyan 4Q végkoncentrációra állítottuk be, hogy 12 térfogatrész pufferoldat 0,01 térfogatrész szérumot tartalmazott. A tárgylemezen levő 1 csepp hígított latexoldatot 1 csepp hígított szérummal kevertük, átkeverés céljából megforgattuk és az agglutinációt megfigyeltük. Ha agglutináció nem következett be, akkor további 1 csepp hígított latexmintát a tárgylemezen 2 csepp hígí-2. 'áblázat IgG-csoport A minták (srám) agglutináció százalékos hányada. koncentráció (RID) mg/dl száma a csoportban 1* 1,5* 2* 2,5* 3* 3,5* 4* 4,5* 5* 5,5* >400 52 (8) 15,3% (12) 23% (28) 53% (4) 7,7% 0 0 0 0 0 0 200—400 16 0 0 0 (2) 12,5% (9) 56,3% (3) 18,3% (1) 6,25% (1) 6,25% 0 0 200 összesen 9 0 0 0 0 0 0 (6) 60% (1) 10% 0 20% (2) 77 minta * A cseppek száma 4
