186734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek enzimatikus előállítására
1 I 186 734 ? /. táblázat folytatása Szubsztrát (konc.) Amin-komponens (konc.) Termék Kitermelés %-ban Ac-Phe-OEt Alanin (0.8 mól) Ac-Phe-Ala-OH 85 (50 mmól) Z-Ala-Ala-OMe Glicin (2,0 mól) Z-Ala-AIa-Gly-OH 40 (10 mmól) Leucin (0,15 mól) Z-Ala-AIa-Leu-OH 0 Fenilalanin (0,15 mól) Z-Ala-Ala-Phe-OH 0 Z-Ala-Phe-OMe Glicin (2,0 mól) Z-Ala-Phc-Gly-OH 35 (10 mmól) Lenéin (0,15 mól) Z-Ala-Phc-Leu-OH 0 Z-Ala-Ser-OMe Leucin (0,15 mól) Z-Ala-Ser-Leu-OH 40 (10 mmól) Z-Ala-Val-OMe Leucin (0,15 mól) Z-Ala-Val-Leu-OH 25 (10 mmól) Lizin (1,5 mól) Z-Ala-Val-Lys-OH 60 Z-Ala-NLeu-OMe Glicin (2,0 mól) Z-Ala-NLeu-Gly-OH 60 (10 mmól) Leucin (0,15 mól) Z-Ala-NLcu-Lcu-OH 16 Z-Ala-Met-OMe Glicin (2,0 mól) Z-Ala-Met-Gly-OH 50 (10 mmól) Leucin (0,15 mól) Z-Ala-Met-Leu-OH 15 Z-Ala-Trp-OMe Glicin (2,0 mól) Z-Ala-Trp-Gly-OH 23 (10 mmól) Leucin (0,15 mól) Z-Ala-Trp-Leu-OH 3 Z-Ala-Trp-OMe Fenilalanin (0,15 mól) Z-Ala-Trp-Phc-OH 0 (10 mniól) Lizin (1,5 mól) Z-AIa-Trp-Lys-OH 36 Z-Ala-Ala-Tyr-OMe Leucin (0,15 mól) Z-Ala-Ala-Tvr-Leu-OH 0 (10 mmól) Lizin (1,5 mól) Z-Ala-Ala-Tyr-Lys-OH 23 Alanin (1,7 mól) Z-Ala-Ala-Tyr-Ala-OH 31 Szintézis aminosa v-amidokkal, . mint amin-komponenssel 3. példa 45 Metionin-amid (Met-NH2-ra 0,6 mólos KCI-re 0,1 mólos és EDTA-ra 1 mmólos (pH 9,8) oldatból 2 ml-t 1 mólos Bz-Ala-OMe 96 % metanolban levő oldatának 100 /xL-vel (0,1 mmól) elegyítettük. A reakciót az 50 1. példában leírtak szerint végeztük és 0,7 mg karboxi-pcptidáz-Y hozzáadásával indítottuk. 30 perc reakcióidő letelte után a pH-t 6 mólos HCI hozzáadásával 1 -re állítottuk, A reakcióterméket tisztítottuk és a nagynyomású kromatográfia módszerével elkülönítettük. 55 A Bz-Ala-Met-NH2 kitermelése 95 % volt. Az 1. példában említett kvantitatív aminosav-analízis szerint a termék 1,0 mól Ala-t, 1,0 mól Met-t és 1,0 mól NH3-at tartalmazott. A reakció lefolyását a 3. ábra szemlélteti, amelyből gg kiderül, hogy 20 percen belül a szubsztrát majdnem teljes mértékben, kb. 95 %-ban dipeptiddé alakul, 5 %*a Bz-Ala-OH-vá hidrolizálódík. 4. példa Valin-amidra (Val-NH2) 0,4 mólos, KCI-re 0,1 mólos és F.DTA-ra 1 mmólos (pH 9,5) oldatnak 2 ml-ét 96 %-os etatiolban levő 1 mólos Bz-Ala-OMe oldatnak 100/d-vel (0.1 mmól) elegyítettük. A reakciót az 1. példában leírtak szerint végeztük. A Bz-Ala-Va!-NH2 reakciótermék a reakció során kicsapódott. 20 perccel ezután a pH-t 1-rc állítottuk és a csapadékot centrifugálással elkülönítettük. A terméket 96 %-os etanol 1 ml-ében feloldottuk, majd tisztítottuk, végül nagynyomású kromatográfiával elkülönítettük. A Bz-Ala-Val-NH2 kitermelése 95 % volt, míg az I. példában - amikor amin-komponensként szabad aminosavat használtunk - csak 40 %-ot kaptunk. Az 1. példában leírtak szerinti kvantitatív aminosavanalízis eredménye 1,0 mól alanin, 1,0 mól valin és 1,0 mól NH3. A reakciószekvencia pH-tól és valin-amid-koncentrációtól való függését a 4. ábra mulatja. A reakciót a fenti szintézishez hasonlóan végeztük a következő paraméterek mellett: 0.6 mólos valin-amid. 55 mmólos Bz-Ala-OMe, 4.5 mólos CPD-Y. pH 9,7, 35 eC. 9
