186583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 2-(kívánt esetben szubsztituált)-amino-karbonil-oxi-alkil-1,4-dihidropiridin származékok előállítására
1 2 működés, angina pectoris, szívizom infarktus, illetve agvérrendszeri rendellenesség esetében. Különböző, a találmány szerint előállított, 2- /adott esetben szubsztituált/-amino-karbonil-oxi-alkíl-1,4-díhidropirídin-származékok gyógyhatását és toxikus hatását vizsgáltuk. 1. Vizsgálati módszerek. a) Koszorúér-tágulás meghatározása A Langendorff eljárásnak megfelelően (0. Langendorff, Pflügers arch. ges. phisiol. 61, 1895, 291 — 332 oldal) vizsgáltuk a koszorúér-tágító hatást izolált házinyúl-szíveken. A koszorúér-tágulás mértékét az ICDrA (g/mD értékkel határoztuk meg, vagyis azzal az adaggal, melv szükséges ahhoz, hogy az alkalmazott hatőanyag-minta a koszorús vérkiáramlás 50%-os növekedését előidézze. b) Félhalálos dózis meghatározása Hím egereknek (DM törzs, 18—22) intravénásán beadjuk a hatóanyag-mintákat és az ún. up-and-down módszerrel meghatározzuk az LD^q értékeket. c) Koszorúerekre gyakorolt hatas vizsgálata kutyákon Nátrium-pentobarbitállal érzéstelenitett vadásztacskók (hím, 13-16 kg) felmetszett mellkasában a baloldali - elől lefelé haladó - koszorú verőérhez szondát illesztettünk, majd a koszorús véráramot (CF) elektromágneses áramlásmérővel mérjük. Ugyanakkor a szabaddá tett jobboldali combverőérhez másik szondát illesztünk és annak véráramát (FAF) is elektromágneses áramlásmérővel mérjük. A baloldali combverőérbe kanült vezetünk be ,és a nagyvérköri véráramban mérjük nyomás-mérőátalakítóval a vérnyomást (BP). A szívverést (HR) elektrokardiogrammal határoztuk meg. A mintaoldatokat intravénásán adjuk be a jobboldali combvénába. Minden egyes hatóanyag-minta beadása után meghatározzuk a koszorús véráramban (CF), a combverőér véráramában (FAF) és a szívverésben (HR) általa okozott változást a referencia-mintaként alkalmazott Fiziológiás sóoldat beadásakor mért értékek százalékában. A nagyvérköri vérnyomás (BP) változását is a referenciaérték százalékában határoztuk meg. 2. Vizsgálati eredmények Az izolált nyúlszív-preparátumoknál tapasztalt koszorúér-tágító hatás és az egereknél tapasztalt toxikus hatás mértékét mintánkénti kimutatásban az 1/a/ és 1/b/ táblázatokban foglaltuk össze. Látható, hogy a találmány szerint előállított új vegyületek igen erős értágító hatást fejtenek ki a koszorús véredényekre igen afacsony toxikus hatás mellett, mely mintegy 1/6—1/17-edrésze a nifcdipin toxikus hatásának. A 2. táblázat 'a vadásztacskóknál tapasztalt koszorúér-tágító hatást szemlélteti. A találmány szerint előállított vegyületekből választott öt minta láthatóan az adagolás növelésének megfelelően növeli a koszorús véráramot (CF) és hatékonyságuk a nifedipinével megegyező vagy annál nagyobb. Az is látható, hogy a koszorúerekre gyakorolt hatás úgy érhető el, hogy emellett a nagyvérköri vérnyomás (BP) nem csökken számottevően és a szívverésre (HR) sem hat ki számottevően a hatóanyag. A szívet így nem terheli járulékosan a kezelés, s ez a tény a toxikus hatás minimumra csökkentésével együtt teszi a találmány szerint előállított új vegyületeket kiemelkedően hasznos koszorúér-tágító hatóanyagokká. Továbbá egy külön farmakológiai teszt, melynek során a 3.(J?6. és 38. példa szerinti hatóanyag-mintákat 1-10 pg/kg ádagolásban intravénásán adtuk be, azt mutatja, hogy az agyi és a végtagi véráram a kezelés hatására 40—50%-kal megnőtt, így e vegyületek az agyi és a végtagi véredényekné! is jól alkalmazható értágító hatóanyagok. A továbbiakban az (I) képletű új vegyületek találmány szerinti előállítását példákkal szemléltetjük, melyekre a találmány nem korlátozódik. A kiindulási anyagok előállítására is közlünk két tájékoztató példát. A termékek azonosításiba alkalmas fizikai jellemzőkként az olvadáspontot és az IR-, UV-, illetve NMR-spektrumokat adjuk meg. Kiindulási vegyületek előállítása A. példa 30 ml benzolban feloldunk 4,5 g m-nitro-benzaldehidet, 5,5 g j3-etoxi-etil-acetoacetátot és 0,4 ml piperidint és visszafolyató hűtő alkalmazásával forraljuk 4 órán át azeotróp dehidratádó feltételei mellett. Ezt követően a reakcióelegyet hűtjük,vízzel mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Az olajos maradékot és 5,7 g e il-4,4-dimetoxi-3-amino-krotonátot 30 ml etanolban feloldva 90°C hőmérsékleten 8 órán át keverés közben reagáltatjuk. Ezt követően a reakcióelegyet lehűtjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot etil-acetáttal extraháljuk. Az extrahált oldatot vízzel mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Az olajos maradékot elkülönítjük és oszlopkromatográfiásan tisztítjuk szilikagélt és eluáló szerként hexán és etil-acetát 8 : 5 arányú elegyét használva, így 8,95 g 4-/3-nitro-fenil/-2-dimetoxi-metil-6-metil-3-t toxi-karbonil-5-//3-etoxi-etoxi/-karbonil-l ,4-dihidropiridint sárga olajszerű anyag formában. A sárga olajos anyagot 100 ml acetonban feloldjuk, 20 ml 6n sósavat adunk hozzá és az elegye! szobahőmérsékleten, keverés közben 5 órán át reagáltatjuk. A reakcióelegyet nátrium-hidrogén-karbonát hozzáadásával közömbösítjük (pH = 7), az acetont csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot etil-acetáttal extraháljuk. Az extrahált oldatot vízzel mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztill áljuk az oldószert. A visszamaradó aldehid vegyületet 200 ml etanolban feloldjuk, hűtés közben 860 mg nátrium-(tetrahidrido-borát)-ot adunk hozzá, és az elegyet keverés közben 1 órán át reagáltatjuk. A reakcióelegy pH-ját (In sósavval) 4-re beállítjuk, majd az elegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etil-acetáttal extraháljuk, az extrahált oklatot vízzel mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradékot oszlopkromatografálással tisztítjuk, szilikagélt és eluálc szerként hexán és etil-acetát 1 : 1 arányú elegyét használva. így 4,2 g kristályos 4/-3-nitro-fenil/-2- -hidroxi-metil-6-metil-3-etoxi-karbonil-5-/|Tetoxi-etoxi/-karbonil-l ,4-dihidropiridint kapunk. UV-spektrum (metnaolban): = 236, 356 nm NMR-spektrum (90 MHz, CJXI3): 5 1,05-1,4 (m, 186 583 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
