186566. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminosavak, peptidek, fehérjék és szénhidrátok immobilizálására
1 186.5<>6 2 min oldatot, A marha szérumalbumin oldásához 0,1 mólos nátrium-formiát puffert (pH = 3,0) használtunk. A szusz penziót 24 órán át 277 KOen inkubáltuk, majd a gélt választottuk és a nem-kötött szérumalbumint 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 5,0) illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát oldattal (pH = 8.5) történő mosásokkal távolítottuk el. A kötött marha szérűinalbumin mennyiség 10 mg volt, ami a reakcióelegybe vitt szérumalbumin 25%-a. 4. példa 0,1 g Akrilex P-100 xerogélt (akrilamid-N.N'-metilén-bisz.-akrilamid kopolimer) 4,0 ml 0,1 mólos foszfát pufferben (pH = 8,0) szuszpendáltunk, hozzáadtuk 0,25 mólos p-benzokinon 20%-os dioxánnak készített 1,0 ml 'mennyiségű oldatát, majd a szuszpenziót 24 órán át 323 K-en tartottuk. Eztuán a duzzadt gélt elválasztottuk és 70 ml 20%-os dioxánnak, ezt kővetően pedig 70 ml desztillált vízzel mostuk. Az aktivált gélt vákuumszűrön szűrtük, majd hozzáadtuk 2,0 ml 20 mg/ml-es marha szérumalbumin odatot. A marha szérumalbumin oldásához 0,1 mólos kálium-nátrium-foszfát puffert (pH = 6,0) használtunk. A szuszpenziót 24 órán át 277 K-en inkubáltuk majd a gélt elválasztottuk és a nem-kötött szérumalbumint 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos nátrium-acetát pufferte) (pH = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát oldattal pH = 8,5) történő mosásokkal távolítottuk el. A kötött marha szérumalbumin mennyiség 4,5 mg volt, ami a reakcióelegybe vitt szérumalbumin 11,25%-a. 5. példa 0.1 g Akrilex P-100 xerogélt (akrilamid-N,N'-metikn-bisz-aktilamid kopolimer) 4,0 ml 0,1 mólos foszfát pufferben (pH = 8,0) szuszpendáltunk, hozzáadtuk 0,25 mólos p-benzokinon 20%0os dioxánnal készített oldatából 1,0 ml-t, majd a szuszpenziót 24 órán át 323 K-en tartottuk. Ezután a duzzadt gélt elválasztottuk és 70 ml 2Q5?kjs dioxánnal, ezt követően pedig 70 ml desztillált vízzel mostuk, Az aktivált gélt vákuumszűrőn szűrtük, majd hozzáadtuk 2,0 ml 20 mg/m-es marha szérumalbumin oldatot. A marha szérumalbumin oldásához 0,1 mólos nátrium-karbonát-hidrogén-karbonát puffert (pH = = 9,0) használtunk. A szuszpenziót 24 órán át 277 K-en inkubáltuk, majd a gélt elválasztottuk és a nem-kötött szérumalbumint 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos acetát pufferrel (pH = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát oldattal (pH = 8,5) történő mosásokkal távolítottuk el. A kötött marha szérumalbumin mennyiség 5,0 mg volt, ami a reakcióelegybe vitt szérumalbumin 12 12,5%-a. 6. példa 0,1 g Akrilex P-100 xerogélt (akrilamid-N.N’-metilén-bisz-akrilamid kopolimer) 4,0 ml 0,1 mólos foszfát pufferben (pH - 8,0) szuszpendáltunk, hozzáadtuk 0,25 mólos p-benzokinon 20%-os dioxánnal készített oldatából ml-t, majd a szuszpenziót 24 órán át 323 K-en tartottuk. Ezután a duzzadt gélt elválasztottuk és 70 ml 20%-os dioxánnal, ezt követően pedig 70 ml desztillált vízzel mostuk. Az aktivált gélt vákuumszűtőn szűrtük, majd hozzáadtunk 2,0 ml 20 mg/ml-es glukózoxidáz oldatot. A glukózoxidáz oldásához 0,1 mólos kálium-nitrium-foszfát puffert használtunk (pH = 7,5). A szuszpenziót 24 órán át 277 K-en inkubáltuk, majd a gélt elválasztottuk és a nem-kötött fehérjét 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát oldattal I (pH = 8,5) történő fíiösásokkal távolítottuk el. A gélen kötött fehérje mennyisége 4,5 mg volt, aktivitása 7,2 egység/g xerogél. Egy egység az az enzim mennyiség, amely 1,0 mikrontól béta-D-glukóz oxidációját katalizálja percenként pH = 7,0-nél 298 K-en, A kötött enzim specifikus aktivitása az oldott enzim specifikus aktivitásának 8%-a volt. 7 példa 0,1 g Akrilex P-100 xerogélt (akrilamid-N,N'-metilén-bisz-akrilamid kopolimer) 4,0 ml 0,1 mólos foszfát (pH = 8,0) szuszpendáltunk, hozzáadtuk 0,25 mólos p-benzokincn 20%0os dioxánnal készített oldatából 1,0 ml-t, majd a szuszpenziót 24 órán át 323 K-en tartoltuk. Ezután a duzzadt gélt elválasztottuk és 70 ml 20%-os dioxánnal, ezt követően 70 ml desztillált vízzel mostuk. Az aktivált gélt vákuumszűrőn szűrtük, majd hozzáadtuk 2,0 ml 20 mg/ml-es kataláz oldatot, A kataláz oldásához 0,1 mólos kálium-nátrium-foszfát puffert (pH = 7,5) használtunk. A szuszpenziót 24 órán át 277 K-en inkubáltuk, majd a gélt elválaszottuk és a nem-kötött fehérjét 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát oldattal (pH = 8,5( törtnő mosásokkal távolítottuk el. A gélen kötött fehéije mennyisége 5,3 mg volt, aktivitása 2100 egység/g xerogél. Egy egység az az enzimmennyiség, amely 1 mikrontól hidrogén-peroxid bomlását katalizálja percenként, 298 K-en. A kötött enzim specifikus aktivitása az oldott enzim specifikus aktivitásának 2%-a volt. 8. példa 0,1 g Akrilex P-100 xerogélt (akrilamid-N,N'-metilén-bisz-akrilamid kopolimer) 4,0 ml 0,1 mólos foszfát pufferben szuszpendáltunk, hozzáadtuk 0,25 mólos p-benzokinon 20%-os dioxánnal készített oldatából 1,0 ml-t, majd a szuszpenziót 24 órán át 323 K-en tartot tuk. Ezután a duzzadt gélt elválasztottuk és 70 ml 20%0os dioxánnal, ezt követően pedig 70 ml desztillált vízzel mostuk. Az aktivált gélt vákuumszűrőn szűrtük, majd hozzáadtuk 2,0 ml 0,01 mólos glukóz oldatot. A glukóz oldásához 0,1 mólos kálium-nátrium-foszfát puffert (pH = 7,5) használtunk. A szuszpenziót 24 órán át 277 K-en inkubáltuk, majd a gélt elválasztottuk és a nem-kötött glukózt 1,0 mól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-acetát pufferrel (pH = 5,0), illetve 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal (pH = 8,5) történő mosással távolítottuk el. A kötött glukóz mennyiség 6 mikrontól volt, ami a reakcióelegybe vitt glukóz mennyiség 30%-a. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
