186460. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 6alfa-metil-hidrokortizon-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 186460 6 keverés közben 10 liter vízbe öntjük. A termék sárgás-fehér színű kristályos csapadék formájában válik ki. Az elegyet 2 órán át tovább keverjük, majd leszívatjuk, vízzel mossuk, és 24 órán át 40 °C hőmérsékleten vákuum - szárítószekrényben foszfor-penloxid felett szárítjuk. Ily módon 111,6 g 17,21-(1- -metoxi-etilidén-dioxi)-6oc-metil-4-pregnén-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 85-87 ®C. b) Curvularia lunata (NRRL 2380) 7-14 napos, ferde-sörcefrés tenyészetét leöblítjük 3 ml fiziológiai nátrium-klorid-oldattal, majd ezzel beoltunk egy 2 literes Erlenmayer-lombikban levő 500 ml - előzetesen 120 °C-on 30 percig autoklávban sterilizált - táptalajt, amely 2% glükózt és 2% kukoricalekvért tartalmaz és a pH-ja 6,5 értékre van beállítva. Forgó rázóberendezésben végzett 60 órai 30 °C-on végzett rázatás után ez a tenyészet szolgál majd az elófermentor beoltására. Az elófermentor térfogata 20 liter és abba az előzőkben megadott összetételű és 121 °C-on, 1 bar túlnyomás alatt sterilizált táptalajt adagolunk be. Ezt a fenti elótenyészet 250 ml-nyi mennyiségével beoltjuk, majd habzásgátlóként Silicon SH-t adunk hozzá és 29 °C hőmérsékleten 0,6 bar nyomású levegővel történő levegőztetés (15 liter/perc) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át fermentáljuk. Ebből az előtenyészetból 1,5 litert használunk majd a főfermentor beoltására. A főfermentor 20 literes és abba 13,5 liter steril táptalajt adagolunk, amely 3% kukoricalekvárt és 0,7% glükózt tartalmaz pH knkorioalekvárt és 0,7% glükózt tarLalmaz pH = 5,5 értékre beállítva. Az 1,5 liter előlenyészettel végzett beoltás után 12 óráig tartó növekedési fázis következik, amelyet az előfermentáiással megegyező körülmények között végzünk. Ekkor hozzáadjuk i2,18 g l?,21-( l-metoxi-eülidéi>-dioxi)-6or-meUl-4- -pregnén-3,20-dion 130 ml dimetil-forniamiddal készült és sterilre szűrt oldatát, majd a ferrnentor tartalmát tovább keverjük és levegőztetjük. A szubsztrátum hozzáadása után 4 órával a táptalaj pll-ját 4,5-re beállítjuk és ezt követően automatikus vezérlés segítségével 16%-ob nátriuin-hidroxid-oldatta) és 20%-os kénsavval a fermentációs folyamat végéig az említett pH-érléken tartjuk, ± 0,2 pll-érték eltéréssel. 51 órai reakcióidő után a mikrobiológiai átalakulás teljesen végbemegy. Ekkor a fermenter tartalmát átvezetjük egy folyamatos centrifugán és a tenyészet szűrletét, valamint az elválasztott gombamicéliurnokal is, kűlön-külön metil-izobutil-ketonnal extraháljuk. A kivonatokat egyesítjük és előbb forgó bepárlóberendezésben 40 “C-on vákuumban 1 liter térfogatra hetöményitjük, majd forgó bepárlóként szerelt 2 literes gőmblombikban 40 °C fürdóbömérsékleten vákuumban teljesen szárazra pároljuk. A kapott olajos maradékhoz 400 ml hexánt adunk, amit erőteljes összerázás után dekaritálunk. Ezután a maradékhoz újból 400 ml hexánt adunk és az elegyet 2 órán ét szobahőmérsékleten keverjük. Ily módon teljesen kristályos maradékhoz jutunk. Ezt leszívatjuk, 100 ml hexánnal mossuk és 4 órán át 60 °C hőmérsékleten vákuum-szárítószekrényben szárítjuk, ilyen módon 9,9 g 17-aceloxí-1 lí ,21 -dihidroxi-6cc-meUl-4-pregnén-3,20- -diont kapunk, amely acélon - diizopropiléter-elegy bői végzett átkristályosítás után 192-194 °C-on olvad. 2. példa a) 15,0 g llß,17,21-lrihidroxi-6cc-metil-4- -pregnén-3,20-diont és 1,5 g piridinium-tozilátot melegítés közben feloldunk 120 ml dimetil-formamid és 1050 ml benzol (vagy toluol) elegyóben. Ezután 140 °C fürdőhőmérsékleten, vizelvdlasztó feltéten keresztül ledesztillálunk 450 ml benzolt (toluolt), majd a reakcióoldatot gyorsan 80 °C hőmérsékletre lehűtjük és 36 ml ortopropionsav-etil-észtert adunk hozzá. Ezután 20 perc alatt kidesztilláljuk a még megmaradt benzolt (toluolt) és vele együtt a könnyen illékony oldószereket. 18 ml piridin hozzátétele után a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. Ily módon 17,21-{l-etoxi-propi!idén~dioxi)-ll£-hidroxi-6x-metil-4-pregnén-3,20-diont kapunk, olajos anyag formájában. b) A fenti eljárással kapott nyers terméket 450 ml metanolban szuszpendáljuk, majd 18 ml 0,1 n vizes nétrium-acetét-oldat és 162 ml 0,1 n vizes ecelsav elegyével 1 órán át 100 °C hőmérsékleten vieszafolyatás közben forraljuk. A reakcióelegyet ezután annak megzavarosodáséig betöményítjük, majd vízre öntjük és nagymennyiségű etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk éB vákuumban szárazra pároljuk. A nyers terméket 650 g szilikagélen metilén-diklorid - acetoneleggyel (az elegy acetontarlalma fokozatosan 0%-ról 20%-ra növekszik) tisztítjuk. 11,2 g Ili,21-dihidroxi-6t£-metil- 17-propioniloxi-4-pregnén-3,20~dionl kapunk, melynek olvadáspontja 197 °C. 3. példa a) A 2. példa a) pontjával analóg módon, 15,0 g lli,17,21-trihidroxi-6oc-metil-4-pregnén-3,20-diont ortovajaav-trimetil-észterrel átalakítunk 1 li-hidroxi-17,21-(l-metoxi-butilidén-dioxi)-6oc-metil-4-pregnén-3,20-dionná. b) A nyers lli~hidroxi-17,21-(l-metoxi-bulilidén-dioxi)-6oc-metil-4-pregnén-3,20-diont a 2. példa b) pontjával analóg módon pufferoldatlal reagállatjuk, majd a reakcióelegyet feldolgozzuk és a terméket tisztítjuk, ily módon 11,4 g 17-butiriloxi-lli,21-dihid-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
