186375. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-származékok előállítására
15 186375 16 Md = + 14,99° (c=0,5, 1 n HCl). WfÍ5= +51,28° (c=0,5, 1 n HC1). Analízis a C32H45FN609S (708,813) képlet alapján: számított : C : 54,23 ; H : 6,40 ; N : 11,86 ; F : 2,86 ; talált: C: 54,47; H: 6,28; N: 11,91; F: 2,51. Aminosav-analízis : Thr : 0,98; Gly: 1,00; Tyr: 1,03; Phe(F) : 0,96 ; NH3 : 1,27 ; peptid% : 86. Az I általános képletű vegyületek fájdalomcsillapító hatását egéren hot-plate- (fűtőlapos) módszerrel mutatjuk ki. E célból a kísérleti állatot egy függőlegesen álló, plexiüvegből készült hengerbe helyezzük, amelynek alaplapja egy 52 °C hőmérsékletre felmelegített fűtőlap. Az egereknek orálisan vagy szubkután injekció formájában beadjuk a vizsgálandó anyag megfelelő mennyiségének valamely vivőanyaggal készült oldatát vagy szuszpenzióját, és az állatot 15 perc múlva rátesszük a fűtőlapra. Meghatározzuk azt a másodpercekben mért késleltetési időt, amelynek elteltével az egér felugrik a forró felületről. Ha valamely anyagnak fájdalomcsillapító hatása van, akkor ezt beadva hosszabb késleltetési időt mérünk, mint azoknál az egereknél, amelyek csak a vivőanyagot kapják. A mérést olyan dózistartományban kell végeznünk, amely dózis még nem zavarja meg az állatok mozgásának koordináltságát, és nem teszi őket mozgásképtelenné. Az alábbi táblázatban megadjuk a fent leírt módon mért ED50-értékeket. I. táblázat Fájdalomcsillapító hatás, a hot-plate-módszerrel meghatározva Vegyület ED50> mg/kg, szubkután 1. példa 0,023 2. példa 1,04 3. példa L-Pgl 0,063 D-Pgl 0,103 4. példa 0,088 A fájdalomcsillapító hatást egereken egy másik módszerrel is kimutathatjuk, mégpedig a vonaglási (writhing)-módszerrel. E kísérlethez 20—22 g testsúlyú, Cox-törzsbeli hím albino egereket használunk, amelyeket éjszakán át éheztetünk. A vonaglást (amely a hasi izomzat összehúzódásában, a hátsó lábak kinyújtásában és a törzs elfordításában nyilvánul meg) úgy idézzük elő, hogy az állatoknak 55 mg/kg dózisban 0,55%-os ecetsavat adunk intraperitoneálisan. A méréseket 5—5 állatból álló csoportokon végezzük. A megfigyelést 5 perccel az ecetsav beadása után kezdve, 10 percen át meghatározzuk a vonaglások számát. A kontrollcsoportok ezen megfigyelési idő alatt 200—350 vonaglást mutatnak. A vizsgálandó vegyületeket 100mg/kg-os dózisban, orális kezelés esetén az ecetsav intraperitoneális adagolása előtt 30, 90 és 180 perccel, szubkután adagolás esetén az ecetsav beadása előtt 30 perccel adagoljuk az állatoknak. Az alábbi táblázatban megadjuk a fent leírt módon meghatározott EDJ0-értékeket. II. táblázat Fájdalomcsillapító hatás, egéren, writhing-módszer Vegyület EDso, mg/kg szubkután ED5o, mg/kg orális 2. példa 3,7 3. példa 0,25 — (D-Pgl5) 3. példa 0,53 73 (L-Pgl5) (15 percre: 230) Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az I általános képletű, ahol R 2 jelentése metilcsoport vagy —CH(OH)—CH3 képletű csoport, R4 jelentése etiltio-metil, p-metoxifenil- vagy fenilcsoport, R5 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és L és D az adott szénatom konfigurációját jelölik, enkefalin-származékok acetátjának előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely I általános képletű, a peptidkémiában ismert módon védett, adott esetben a peptidkémiában ismert műgyanta-hordozóhoz kötött enkefalin-származékról — R2, R4 és Rs a fent megadott — a védőcsoportot (vagy védőcsoportokat) lehasítjuk, és az adott esetben jelenlevő műgyanta-hordozót és a terméket ecetsawal kezeljük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a védőcsoportok lehasítására trifluor-ecetsavat használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy valamely műgyanta-hordozóra kötött kiindulási anyagot használunk, és a védőcsoportok lehasítását 0 °C hőmérsékleten hidrogén-fluoriddal végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja L-tirozil-D-alanil-glicil-L-p-fluor-feniI-alanil-L-(N“-metil)-metionil-amid acetát-sójának előállítására, azzal jellemezve, hogy az L-tirozil-D-alanil-glicil-DL-p-fluor-fenil-alanil-L-(Na-metil)-metionil-benzhidrilamin-gyanta, trifluor-ecetsavas sót 0 °C hőmérsékleten hidrogén-fluoriddal, végül ecetsavval kezeljük. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja L-tirozil-D-alanil-glicil-L-p-fluor-fenil-alanil-L-p-metoxi-fenil-glicin-amid acetát-sójának előállítására, azzal jellemezve, hogy NM-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-DL-p-fluor-fenil-alanil-L-p-metoxi-fenil-glicin-amidot trifluor-ecetsawal, majd ecetsavval kezelünk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja L-tirozil-D-alanil-glicil-L-p-fluor-fenil-alanil-L-fenil-glicin-amid acetát-sójának előállítására, azzal jelle-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
