186121. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagyttisztaságú A-ristomycin és/vagy ristomycin-származék előállítására és ezt tartalmazó reagens thrombolyta aggregációs vizsgálatokhoz
186121 2 A fentiek szerint előállított vegyület az A-ristomy-NaCl 0,90 cinnel azonos módon aggregálta a normális thrombo-KC1 0,040 cytákat. CaCl2 0,025 NaH2 P04 0,020 5 Az ionok koncentrációja maeg/1-' 4. példa Na+ 156 A reagens készítése K+ 5 Ca++ 5 Az ismertetett minőségi követelményeknek megfeci-164 lelő 15,00 g kristályos A-ristomycin-monoszulfátot és 10 HCO3-2 100 ml desztillált vizet (pH=6,8) 1 literes Erlenmeyer-4. Locke oldat készítése: lombikban elszuszpendáltunk. A lombik falára kiváló Sókoncentráció (vízmentes sóra hatóanyagot állandó rázogatás mellett további %-ban 400—500 ml. deszt. vízzel oldatba vittük. Az így kaNaCl 0,90 pott homogén hatóanyagtartalmú oldatot egy 1000 15 KC1 0,042 ml-es mérőlombikban szálmentesre szűrtük, az oldásCaCl2 0,024 ra használt lombikot és a szűrőt kvantitatíve utána NaHCOj 0,020 mostuk és végül a mérőedényt jelig töltöttük. A fentiGlucose 0,10 ek szerint készített oldat 15 mg/ml-es koncentrációAz ionok koncentrációja maeg/1-1 ban tartalmazta az A-ristomycin-monoszulfátot. (Ste20 Na+ 156 ril kiszerelés igénye esetén az oldatot 30—60 percig K+ 6 100 °C-on tartottuk, majd szobahőmérsékletre hűtöt-Ca++ 4 tük.) Ezután az oldatból adagoló automatával (aszepci-164 tikus körülmények) pontosan 1,00—1,00 ml-es térfoHCO3 -2 gatokat, anyagában barna színű ún. tépőzáras injek-25 Glucose 6 mmól/1 dós üvegekbe mértük és gyorsfagyasztást követően liofilizáltuk, majd lezártuk. Az adagolás helyességének és a liofilizálás teljességének ellenőrzése céljából chargeonként, néhány üveg A-ristomycin tartalmát (15 mg) HPLC-módszerrel és súlyméréssel ellenőriztük. B. Reagens oldat készítése Az A. pontban elkészített 15 mg liofilizált A-ristomycin-monoszulfátot az alábbi diluensekkel oldhatjuk fel: 1. TRIS puffer készítése: 2,42 g TRIS-hidroximetil-aminometán 8,64 g NaCl ad 1000 ml pH = 7,4 2. Tyrode oldat készítése Sókoncentráció (vízmentes sóra vonatkoztatva) %-ban NaCl 0,80 KC1 0,02 CaCl2 0,02 MgCl2 0,01 NaHCOj 0,10 NaH2P04 0,036 Glucose 0,10 ionok koncentrációja maeg/1-Na+ 144 K+ 3 Ca++ 4 Mg++ 2 ci-146 HCOj-12 H2POí 3 Glucose 6 mmól/1 3. Ringer oldat („emelős”) készítése: Sókoncentráció (vízmentes sóra vonatkoztatva) %-ban Szabadalmi igénypontok Eljárás nagytisztaságú (I) általános képletű ristomycin- és/vagy ristomycin-származékok — ahol R hidrogénatomot, R, O-alfa-D-arabinofuranozil (l~>2)-0-alfa-D-mannopiranozil(l->2)-0-[alfa-L-ramnopiranozil]-(l -* 6)-0-béta-D-glükopiranozil csoportot, R 2 2,3,6-tridezoxi- 3 -amino- (NH Y) -alfa- L -ribo-hexapiranozil csoportot, R3 alfa-D-mannopiranozil csoportot, R4 1—4 szénatomszámú alkilcsoportot, X ásványi savmaradékot Y pedig hidrogénatomot vagy C(Z)j—(CH2)n—CO— csoportot jelent, ahol is Z hidrogénatomot vagy halogénatomot, n pedig 0-tól 5-ig terjedő egész számot jelent — előállítására, azzal jellemezve, hogy a nyers ristomycin-bázis 30—50%-os vizes oldatát ásványi savval előnyösen hígított kénsavval kezelve az oldat pH-ját 6,7—7,0 közé, célszerűen pH=6,8-ra állítjuk vagy szennyezett A-ristomycin-monoszulfát 30—50%-os vizes oldatát lúg-oldattal, előnyösen ammónium-hidroxiddal pH = 6,7—7,0 közé állítjuk, majd 20—50% (v/v)-nyi vízzel elegyedő, rövidszénláncú alifás karbonsavnitrilt, célszerűen acetonitrilt adunk hozzá szobahőmérsékleten, majd (4°C-on kristályosítjuk, kívánt esetben szerves oldószerben, előnyösen 1—5 szénatomos alkanolban oldjuk, majd savanhidrid-tipusú acilezőszerrel, előnyösen trifluor-ecetsav-anhidriddel, 0—20 °C hőmérsékleten acilezzük, majd a termék(ek)et izoláljuk. 2. Thrombocyta-aggregációs vizsgálatra és/vagy trombolitikus folyamatok, előnyösen Willebrand-betegség, DIC (diffúz intravasculáris coaguláció) diagnosztizálására, alkalmas reagens, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, 30 30 40 45 50 55 60 65 6
