186117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil S-adaenozil-metionin származékok előállítására
186117 2 5. táblázat SAM-észterek analitikai adatai Vegyüld Tapasztalati képlet N<?o szám. talált s* szám. talált E 1 “'a 1 cm pH =4 SAM-etil-észler-kénsav-víz ( 1/2/0.5) CpHjoNftOu S,0,5H2O 13,29 13.27 15,19 15,18 222 SAM-n-propíl-észter-kénsav-viz (1/2/0.5) C18H32N6O1J Sj0,5H2O 13.00 13,02 14,86 14,85 217 SAM-n-bulil-észter-kénsav-víz (1/2/0.5) C19H34N6O1J S30,5H2O 12,73 12,71 14,55 14,52 213 SAM-n-pentil-észter-kén sav-víz (1/2/0.5) CmHiíNsOu S3’0,5H2O 12,46 12,45 14,24 14,25 208 SAM-n-hexil-észter-kén sav-víz (1/2/0.5) C2|H38N60|3 S3 -0,5H2O 12,21 12,23 13,95 13,93 204 ■ 1%-os vizes oldatban (pH 4), I cm-es küvettában, 236 mm-es 4. példa 1 kg SAM-ionnak megfelelő mennyiség: SAM-szulfátot 10 1 vízben oldunk és az oldatot 1 °C-ra hűtjük. A pH-t 2 n nátrium-hidroxiddal 7-re állítjuk, miközben a hőmérsékletet a hűtőfolyadék cirkuláltatásával állandó értéken tartjuk. A hőmérsékletet továbbra is 1 °C-on tartva 285 ml ecetsavanhidridet adunk 1 óra leforgása alatt az oldathoz, miközben a pH-t 7 értéken tartjuk, 2 n nátrium-hidroxid adagolásával. Az ecetsavanhidrid hozzáadása után a fenti hőmérsékletet tartva megvárjuk, míg a pH értéke állandósul, majd a hőmérsékletet 20 °C-ra hagyjuk emelkedni. 95%-os hozammal kapjuk a monoacetilszármazékot. A reakcióelegyet 201 desztillált vízzel hígítjuk. 50 1 hidrogénion-ciklusban lévő AMBERLITE IRC 50 gyantából oszlopot készítünk úgy, hogy a gyantát 100 1 0,5 n kénsavval aktiváljuk és vízzel semlegesre mossuk. A reakcióelegyet 50 1/óra sebességgel átfolyatjuk az oszlopon. Az oszlopot 50 1 desztillált vízzel mossuk. 0,1 n ecetsavoldatot (körülbelül 400 1) folyatunk át az oszlopon, míg az eluátum pH értéke 3 lesz. Az oszlopot 5010,02 n kénsavval mossuk, a változatlanul maradt nyomnyi mennyiségű SAM eluálása céljából. Eztán az oszlopot 50 1 0,1 n kénsavval eluáljuk. Az oldatot vákuumban (35 °C, 3871 Pa) körülbelül 10 1-re töményítjük, majd 50 g aktív szénnel kezeljük és szűrjük. Az oldatot titráljuk, a monoacetil-SAM és a kénsav morális arányát tömény kénsavval 1:2-re állítjuk, majd az oldatot liofilizáljuk. 900 g monoacetil-SAM-kénsav-víz (1/2/0,5) sót kapunk, amelynek összetétele: monoacetil-SAM 68,3% kénsav 30,3% víz 1,4% az SAM-ra számított hozam 61,5%. A terméket nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel vizsgálva (PARTISIL 10 SXC oszlop, eluens: 0,1 mól/1 ammónium-formiát pH 4, mért extinkció 20% metanol, átfolyási sebesség: 1 ml/perc) egy 20 csúcsot kapunk, 360 s retenciós idővel. A terméket UV- ÉS NMR-spektruma alapján is azonosítottuk. UV-spektrum: pH 4-nél abszorpciós maximum 25 258 nm-nél, £=14,040 pH 1-nél abszorpciós maximum 256 nm-nél, £ = 13,500 NMR-spektrum: 2 ppm-nél acetilcsoportra jellemző szingulett, 30 3 ppm-nél §-CH3 csoportra jellemző szingulett. A termék nem ad pozitív ninhidrin reakciót, amiből az aminosav-csoport átalakulására következtethetünk. Ha a moláris sztöchiometrikus arányt a liofilizá- 35 lás előtt a kénsavra nézve 1,5 vagy 2,5-re állítjuk, a következő sókat kapjuk: — monoacetil-SAM-kénsav-víz (1/1,5/0,5), — monoacetil-SAM-kénsav-víz (1/2,5/0,5), Ha az oszlop eluálására kénsav helyett metán-40 szulfonsavat vagy hidrogén-kloridot használunk, a következő sókat kapjuk: — monoacetil-SAM-hidrogén-klorid (1/3/0,5), — monoacetil-SAM-hidrogén-klorid (1/4/0,5), — monoacetil-SAM-hidrogén-klorid (1/5/0.5), 45 — monoacetil-SAM-metánszulfonsav-víz (1/3/ 0,5), — monoacetil-SAM-metánszulfonsav-viz (1/4/ 0,5), — monoacetil-SAM-metánszulfonsav-víz (1/5/ 50 0,5). A fenti sók UV- és NMR-spektruma azonos a monoacetil-SAM-kénsav-víz (1/2/0,5) só megfelelő spektrumával. A monoacetil-SAM-sók elemzési eredményeit a következő táblázatban közöljük. 55 5. példa A 4. példa szerinti eljárással ecetsavanhidrid he- 60 lyett propionsavanhidridet, vajsavanhidridet, hexánsavanhidridet, benzol-kloridot, p-toluolszulfonil-kloridot, borostyánkősavanhidridet vagy glutársavanhidridet használva a 7. táblázatban felsorolt SAM-acil-származékokat kapjuk. 6
