186117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil S-adaenozil-metionin származékok előállítására
186117 2 1 :5 — 1:10 mólarányban alkalmazzuk, miközben a hőmérsékletet I °C-on és a pH-t 2 n nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával 7 értéken tartjuk. A reakció befejeztével a hőmérsékletet 20 °C-ra hagyjuk emelkedni. Az SAM triacilszármazékká alakulása körülbelül 80%. Az oldatot 20 g/1 koncentrációra hígítjuk és az esetleg kiváló csapadékot leszűrjük. A kapott oldatot ioncserélő gyantán kromatografáljuk. Az összes előbb említett esetben hidrogénion-ciklusban lévő, előzőleg vízzel mosott, gyengén savas gyantával (AMBERLITE IRC 50 vagy CG 50) töltött oszlopon kromatografálunk, a következő paraméterek betartásával: — gyantaágy átmérőjének és magasságának aránya 1:10 — terhelhetőség: 20 g SAM-származék/liter gyanta — átfolyási sebesség: 1 oszloptérfogat/óra. Az oszlopot ezután 1 térfogat vízzel, majd 0,1 n ecetsavval mossuk, míg az eluátum pH értéket mutat. Az oszlopot a maradék SAM és az egyéb melléktermékek teljes eluálódásáig 0,020 n kénsavval mossuk, majd a kívánt terméket 0,1 n kénsavval (vagy egyéb kívánt só esetén más erős savval) eluáljuk. A kapott oldatot vákuumban 50 g/1 koncentrációra töményitjük be. Az oldatot aktív szénnel (SAM-származékra számítva 1:10) szűrjük, a savmennyiséget a kívánt sztöchiometriai értékre beállítjuk és az oldatot liofilizáljuk. C) (I) általános képletü vegyes származékok előállítása Azokat az SAM-származékokat, amelyek (I) általános képletében R, Rí és R2 jelentése hidrogénatomtól eltérő, úgy állítjuk elő, hogy először az A) pontban leírtak szerint észterezünk, majd a kapott észtert vizes oldatban a B) pontban leírtak szerint acilezzük. A találmányt az alábbi példákkal kívánjuk megvilágítani. /. példa 1 kg SAM-ionnak megfelelő mennyiségű SAM-szulfátot 201 2 térfogati tömény kénsavat tartalmazó metanolban oldunk. Az oldatot 16 órán át visszafolyatós hűtő alatt forraljuk, majd lehűtjük, 20 1 desztillált vízzel hígítjuk és előzőleg 2 n nátrium-hidroxiddal aktivált és vízzel semlegesre mosott AMBERLITE IRA 93 gyantával kezeljük pH 3 érték eléréséig. Körülbelül 15 1 gyantát használunk. Az elegyet leszűrjük és desztillált vízzel mossuk. A metanolt vákuumban elpárologtatjuk. Az oida tot 20 percen keresztül forraljuk a változatlanu maradt SAM eltávolítása céljából majd lehűtjük. 40 1 hidrogénion-ciklusban lévő AMBERLITI IRC 50 gyantából oszlopot készítünk úgy, hogy : gyantát 100 1 0,5 kénsavval aktiváljuk és vízzé semlegesre mossuk. Az előző bekezdésben leírtai szerint kapott oldatot 2 n nátrium-hidroxiddal pb 6,5-re állítjuk, 40 1/óra sebességgel átfolyatjuk ; gyantaoszlopon, majd 40 1 vízzel mossuk. Az oszlopon 0,1 n ecetsavat (körülbelül 2001 fo lyatunk át, míg az eluátum pH-ja 3 lesz, majd 40 1 desztillált vizet engedünk át az oszlopon. Az eluálást 60 1 0,1 n kénsavval végezzük. Az eluátumot vákuumban (35 °C, 3871 Pa) körülbelül 101-re töményitjük, 50 g aktív szenet adunk hozzá és az elegyet szűrjük. Az oldatot titráljuk. Az SAM-meil-észter és a kénsav moláris arányát tömény kénsawal 1:12-re állítjuk, majd az oldatot liofilizáljuk. 820 g terméket kapunk, melynek összetétele: SAM-metil-észter 66,8% kénsav 31,7% víz 1,5% Képlete: SAM-metil-észter-kénsav-víz (1 (2)0,5) A hozam az SAM ionra számítva 54,7%. A terméket nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel vizsgálva (PARTISIL 10 SCX oszlop, eluens: 0,1 mól/1 ammónium-formiát, pH-4, 20% metanol, átfolyási sebesség 1 ml/perc), egy csúcsot kapunk, 580 s retenciós idővel. A terméket UV és NMR analízissel is azonosítottuk. UV-spektrum: pH 4-néI abszorpciós maximum 258 nm-nél, e = 14,040, pH 1-nél abszorpciós maximum 256 nm-nél, e= 13,500. NMR-spektrum: 3 ppm-nél S-CH3 csoportra jellemző szingulett, 3,7 ppm-nél R-CO-O-CH3 csoportra jellemző szingulett. Ha a sztöchiometriai összetételt a liofilizálás előtt SAM-metil-észter-kénsav 1:1,5 vagy 1:2,5 értékre állítjuk, a következő megfelelő sókat kapjuk:-SAM-metil-észter-kénsav-víz (1/1,5/0,5), -SAM-metil-észter-kénsav-víz (1/2,5/0,5). Ha az IRC 50 oszlopot kénsav helyett hidrogén-kloriddal eluáljuk, a következő sókat kapjuk: -SAM-metil-észter-hidrogén-klorid-víz (1/3/0,5), -SAM-metil-észter-hidrogén-klorid-viz ( 1 /4/0,5), -SAM-metil-észter-hidrogén-klorid-víz (1/5/0,5). Hasonló módon metánszulfonsavval a megfelelő metánszulfonát-sókat állíthatjuk elő. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 4
