185990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új cefem-karbonsav-származékok előállítására
1 185 990 A találmány szerinti /3-laktám-antibiotikumok hatásossága például a következő vizsgálatokkal mutatható ki. 1. In vitro kísérletek A vizsgálatokra a sorozatos hígítási próbát mikrotiterrendszerben alkalmaztuk A vegyületeknek a baktériumfejlődésre gyakorolt gátló hatását folyékony közegben vizsgáltuk. A gátló hatást a következő koncentrációkban vizsgáltuk: 128. 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,12, 0,06 /ig/ml. A következő összetételű táptalajt használtuk: 10 g peptont, 8 g marhahúskivonatot, 3 g nátrium-kloridot, 2 g dinátrium-hidrogén-foszfátot desztillált vízzel 100 ml-re kiegészítettük. Az oldat pH-ja 7,2—7,4. Az elsődleges tenyésztés időtartama 20 óra volt. A sejtszuszpenzió koncentrációjának beállítását Eppendorf-féle fotométerrel 14 mm átmérőjű kémcsőben 546 nm szűrővel végeztük olyan bárium-szulfát szuszpenzió zavarosságával hasonlítva össze, amelyet 3,0 ml 1%-os bárium-klorid oldatnak 97 ml 1%-os kénsav-oldathoz való hozzáadásával kaptunk. A beállítás után a sejtszuszpenziót konyhasóoldattal 1:1500 arányban tovább hígítottuk. Mindegyik vegyület 16 mg-ját 10 ml-es mérőlombikba mértük be és az oldószerrel jelig feltöltöttük. A további hígítássorozatot desztillált vízzel vagy a mindenkori oldószerrel állítottunk elő. A mikrotiter-lemezek mélyedéseibe 0,2 ml táptalajt, 0,01 ml megfelelően hígított vegyületet és egy csepp (0,01 ml) sejtszuszpenziót vittünk be és 18—20 óra hosszat 37 °C-on inkubáltuk. Kontrollként mindig oldószert is inkubáltunk. A leolvasást szabad szemmel végeztük és a mindenkori határkoncentrációt (baktériumfejlődést gátló legkisebb koncentrációt) meghatároztuk. Kísérleti mikroorganizmusokként a következőket alkalmaztuk: Staphylococcus aureus SG 511, Escherichia, coli ATCC 11 775, Pseudomonas aeruginosa Hamburensis és Pseudomonas aeruginosa BC 19, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ATCC 10 031 és BC 6, Proteus mirabilis BC 17, Proteus rettgeri, Enterobacter cloaceae ATCC 13 047, Escherichia coli R+TEM (0-laktamáz-termelő), Klebsiella pneumonieae 1082 E (/3-laktamáz-termclő). 45 50 55 60 65 7
