185986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált n-(karboxi-alkik)-aminoacil-prolin-dipeptid-származékok előállítására
1 2 185 986 son eltávolítjuk. így 195 g N-(benziloxi-karbonil)-L- alanin-terc-butil-észtert kapunk sárgás olajként, amelyet további tisztítás nélkül felhasználunk. b) L-Alanin-terc-butil-észter-hidroklorid. 107 g nyers N-(benziloxi-karbonil)-L-alanin-terc-butil- g észtert oldunk 800 ml vízmentes etanolban, és a zavaros oldatot Celit-en át szűrjük. A kapott tiszta oldathoz 383 ml 1 n etanolos sósavoldatot és 10 g palládiumosszén katalizátort adunk. A kapott elegyet szobahőmérsékleten 100 kPa (1 atm) nyomáson éjszakán át hidrogénezzük. A katalizátort Celit-en át kiszűrjük, és az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Dietil-éter hozzáadására színtelen szilárd anyag keletkezik. Szűrjük, dietil-éterrel mossuk, és vákuumban szárítjuk. így 54,25 g L-alaninterc-butil-észter-hidrokloridot kapunk színtelen szilárd ^ g anyagként, amelynek olvadáspontja 164—165 °C (bomlás); fajlagos forgatóképessége, [a]“ = + 2,34° (c=2,2; metanol). c) N-[l(S)-(Etoxi-karboniI)-3-fenil-propil]-L-alanin-terc-butil-észter. 20 4,86 g (0,0267 mól) L-alanin-terc-butil-észter-hidroklorid 35 ml vízmetes etanollal készített oldatához 4,2 ml (0,00672 mól) 1,6 n etanolos nátrium-etanolát oldatot adunk. A kapott tejszerű oldathoz, amelynek pH-ja körülbelül 7,5 hozzáadjuk 27,6 g (0,135 mól) 4-fenil-2-oxo- 25 vajsav-etil-észter (amelyet 4-fenil-2-hidroxi-vajsav-etilészter oxalil-kloriddal való reagáltatásával állítunk elő) 25 ml etanollal készült oldatát, majd ezt követően 22 g elporított 3 A méretű molekulaszitát. A kapott elegyet szobahőmérsékleten keverjük, és a következő 30 percben 30 összesen 4,8 ml (0,00768 mól) 1,6 n etanolos nátriumetanolát oldat hozzáadásával 6 és 7 között tartjuk a pH-t. További 30 perc keverés után 6 óra alatt hozzáadjuk 3,35 g (0,0535 mól) nátrium-ciano-bórhidrid 20 ml etanollal készített oldatát. További 40 óra keverés után az elegyet 35 Celiten szűrjük, és utána csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 350 ml dietil-éterben oldjuk, és a kapott oldatot 3x100 ml vízzel mossuk, és utána 3x100 ml 1 n sósavoldattal extraháljuk. A sósavas extraktumokat egyesítjük, dietil-éterrel mossuk, és 70 ml 4 n nátrium- 40 hidroxid oldattal majd 1 n nátrium-hidrogén-karbonát oldattal meglúgosítjuk. A kapott elegyet 2x350 ml dietiléterrel extraháljuk. Az éteres frakciókat egyesítjük, vízzel és nátrium-klorid oldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert csökkentett 45 nyomáson eldesztilláljuk, így nyersterméket kapunk diasztereomerek elegyeként, amelyek Rf értékei szilikagélen petroléter: dietil-éter (1:1) elegyben: 0,46 (nem kívánt izomer) és 0,36 (kívánt izomer). A nyersterméket utána szilikagéllel töltött oszlopon petroléter: dietil-éter (3:1) 50 eleggyel átmossuk. Szilikagél oszlopon hexán: etil-acetát (92:8) eleggyel kromatografálva N-[l(S)-(etoxi-karbonil)-3-fenil-propil]-L-alanin-terc-butil-észtert kapunk színtelen olajként. Rf = 0,36 (szilikagél; petroléter: dietil-éter =1:1). 55 d) N-[l(S)-(Etoxi-karbonil)-3-fenil-propil]-L-alanin. 2,54 g (0,00757 mól) c) pontban kapott terc-butilészter-származék 25 ml trifluor-ecetsavval készített oldatát szobahőfokon 3 órát keverjük. A trifluor-ecetsavat utána csökkentett nyomáson eldesztilláljuk. Benzolt 60 adunk a maradékhoz, és az oldószert csökkentett nyomáson újból eltávolítjuk. A maradékot 75 ml hidrogénciklusú AG50W-X2 ioncserélő gyantával töltött oszlopra engedjük rá. Vízzel végzett mosás után az oszlopot 3%-os vizes piridinoldattal eluáljuk, és 23 ml-es frakciókat sze- 65 dünk. A terméket tartalmazó 12—20. frakciókat egyesítjük, és lioftlizáljuk. így 1,63 g N-[l(S)-(etoxi-karbonil)-3- fenil-propiI]-L-alanint kapunk fehér szilárd anyagként, amelynek fajlagos forgatóképessége foí]f” = = +26,1° (c = 1,50; metanol). Rf = 0,28 (szilikagél; kloroform: metanol: ecetsav = 10:1:1). e) (mzj-4-Feniltio-L-prolin-metil-észter-hidroklorid. 60 ml —20 °C-os metanolhoz argongáz alatt 3,2 ml (0,045 mól) acetil-kloridot adunk. Az elegyet —20 °C-on 3 órát keverjük, utána hozzáadunk 5,0 g (0.022 mól) í«.s")-4-feniltio-L-prolint [amely az Ondetti és mtsai. által a 2,028.237 sz. nagy-britanniai szabadalmi bejelentés 44. példájában leírt eljárás szerint állítható elő] majd cseppenként 1,63 ml (0,022 mól) tionil-kloridot. A reakcióclegyet —20 °C-on 3 órát keverjük, utána a hűtőfürdőt eltávolítjuk, és az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert utána csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot 1 n nátrium-hidrogénkarbonát oldattal és dietil-éterrel rázzuk össze, majd a szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. A kapott oldatot fölös mennyiségű metanolos sósavoldattal elegyítjük, és utána csökkentett nyomáson bepároljuk. Metanol/dietil-éter elegyből átkristályosítva 1,89 g (m.:)-4-feniltio-L-prolin-metil-észter-hidrokIoridot kapunk színtelen, szilárd anyagként, amelynek olvadáspontja 87—89 °C, fajlagos forgatóképessége. [a]o° = = 3,7° (c = 2,05; metanol). 0 [l(S),4S]-l-iN-[l-(Etoxi-karbonil)-3-fenil-propil]-L- alanil]-4-feniltio-L-prolin-metil-észter. 0,500 g (0,00179 mól) N-[l(S)-(etoxi-karbonil)-3-fenilpropil]-L-alanin és 0,540 g (1,1 ekv.) (cwz)-4-téniItio-L- prolin-metil-észter-hidroklorid 8 ml dimetií-,formamiddal készített 0 °C-os oldatához argongáz alatt cseppenként 0,43 ml (1,1 ekv.) difenil-foszforil-azidot adunk. Néhány perces keverés után 10 perc alatt belecsepegtetjük 0,55 ml (2,2 ekv.) trietil-amin 1,5 ml dimetil-formamiddal készített oldatát. A reakcióelegyet 3 órát keverjük, utána a hűtőfürdőt eltávolítjuk, és az elegyet szobahőmérsékleten 19 órát keverjük. A kapott elegyet etilacetáttal hígítjuk, és 1 n nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, kétszer vízzel, 1 n nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és nátrium-klorid oldattal mossuk. Vízmentes magnézium-szulfáton végzett szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen etil-acetát: aceton: diklór-metán (35:5:60) oldószercleggyel eluálva kromatografáljuk. így 0,55 g [1(S) 4S]-l-|N-[l-(etoxi-karbonil)-3-fenil-propil]-L-alanil]-4-feniltio-L-prolin-metil-észtert kapunk halványsárga olajként. Rf = 0,37 (szilikagél; etil-acetát). g) [l(S),4S]-l-[N-(3-fenil-l-karboxi-propi!)-L-alanil]-4- feniltio-L-prolin. 0,550 g (0,0011 mól) [l(S),4S]-l-[N-[l-(etoxi-karbonil)-3-fenil-propil]-L-alanil)-4-feniltio-L-prolin-metil-észter 7 ml etanollal készített oldatához argongáz alatt 2,4 ml (2,2 ekv.) 1 n nátrium-hidroxid oldatot adunk. Szobahőmérsékleten 4 órát keverjük, utána az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot 30 ml hidrogénciklusú AG50W-X2 ioncserélő gyantával töltött oszlopra felkötjük. Vízzel való mosás után az oszlopot 3%-os vizes piridinoldattal eluáljuk, és 7 ml-es frakciókat szedünk. A terméket tartalmazó 10—14. frakciókat egyesítjük, és liofilizáljuk, így 0,455 g [1(S),4S]-1-[N(3-fenil-l-karboxi-propiI)-L-a!anil]-4-feniltio-L-prolint kapunk szilárd fehér anyagként. 5
