185968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású nitrozo-karbamidszármazékok előállítására
1 2 185 968 A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületök a korábban ismert vegyületek többségétől két dologban térnek el: először; a cikloalkilcsoport és a karbamid nitrogénatomja között egy metiléncsoport van, másodszor; a cikloalkilcsoport «-szénatomjához egy hidroxilcsoport kapcsolódik. A találmány szerint előállított vegyületek nem várt módon hatásos tumorellenes szerek, még kis dózisban is hatásosak, és toxicitásuk alacsonyabb, mint az MeCCNU toxicitása, ezáltal kedvezőtlen mutagén és/vagy rákkeltő hatásuk minimálisra csökkenthető. Ezen kívül a vegyületek gerincevelő károsító hatása is minimális — ha egyáltalán van ilyen hatásuk. Fenti vegyületek ember és más emlősök daganatainak kezelésére alkalmasak. A találmány szerint előállított vegyületek közül előnyösek azok, amelyekben X jelentése klóratom. Az n jelölésű, 4—7 közötti értékű egész szám legelőnyösebb értéke 5. A találmány szerinti eljárás i) lépésében a 2-halogén-etíl-izocianát (II) általános képletű vegyülethez való előnyös mólaránya 1:1, az ii) lépésben a nitrit mólaránya az i) lépés termékéhez előnyösen 2:1. A találmány szerinti eljárást az alábbiakban példában mutatjuk be. A megadott olvadáspontokat Thomas-Hoover-féle kapilláris olvadáspont-meghatározó készülékkel mértük, az értékek korrigálatlanok. Az infravörös spektrumokat Perkin Elmer 397 spektro fotométerrel, a magmágneses rezonancia spektrumot Nicolet 200 MHz készüléken deuterokloroformban, tetrametil-szilán belső standard alkalmazásával vettük fel. Példa 3-(2-Klór-etil)-l-(l-hidroxi-cik.lohexil)-metil-3-nitrozo-karbamid előállítása (III) képletű vegyidet -(neostatin) 16,6 g (0,1 mól) l-amino-metil-ciklohexán-l-01-hidrogén-kloridot 13,9 ml (0,1 mól) trietil-aminnal 75 ml vízmentes dietil-éterben elkeverünk, és az oldatot 5 °C alá hűtjük. 10,5 g (0,1 mól) 2-klór-etil-izocianátot 25 ml dietil-éterben oldunk és kis részletekben keverés közben a fenti oldathoz adjuk, az adagolás közben a hőmérsékletet 5 °C alatt tartjuk. A reakcióelegyet további 2 órán át keverjük, majd leszűrjük. A visszamaradó anyagot 20— 20 ml dietil-éterrel kétszer mossuk, majd 20 ml vízben szuszpendáljuk. A szuszpenziót szűrjük, a visszamaradó anyagot 20 ml vízben ismét szuszpendáljuk. majd ismét leszűrjük. Végül a csapadékot vákuumban, vízmentes kalcium-klorid/kálium-hidroxid fölött szárítjuk. 83%-os hozammal 19,5 g fehér por formájú karbamidszármazékot nyerünk, melynek olvadáspontja 109—110 °C. 11,7 g (0,05 mól) fenti karbamidszármnzékot 50 ml '98%-os hangyasavban oldunk és az oldatot 0 gC-Ta hűtjük. Ehhez az oldathoz a hőmérsékletet állandóan 5 °C alatt tartva, erős keverés mellett részletekben hozzáadunk 6,9 g (0,1 mólhnátrium-nitritet. Az elegyet további 1 órán át keverjük, majd 100 ml vizet adunk hozzá. Az elegyet 30 ml dietil-éterrel extraháljuk és 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, majd bepároljuk. Ily módon 82%-os hozammal 13,2 g (Hl) képletű rütrozo-karbamidot kapunk olajos szilárd anyag formájában. Az infravörös színképen 1710 cm'1 (C—0) és 1530 cm-1 (C—N—H) értékeknél jelentkeznek sávok. A magmágneses rezonancia spektrumban 4,2 ppm-nél tripled (2H, J=6,5 Hz), 3,5 ppm-nél tripled (2H, J=fö,5 Hz) és 1,6 ppm-nél multiplen (12H) jelentkezik. Az 1-nitrozo— izomer körülbelül 30% mennyiségben van jelen. Tumorellenes hatás vizsgálata A tumorellenes hatás vizsgálatát a National Cancer Institute (NCI), [Drug Evaluation Branch, National Institutes of Health (NIH), Bethesda, Maryland. USA] végezte az ott előírt eljárás szerint. A vizsgálati állatok CDF, törzsből származó hím és nőstény egerek voltak. Minden egérbe 105 L-1210 limfoid leukémia tumorsejtet ültettünk be intraperitoneálisan — az NIH előírásoknak megfelelően. A beültetés után egy nappal a vizsgálandó vegyületet, a neostatint vagy a MeCCNU-t 10 térf. % etanolt, 10 trf. % Emulphor emulgeálószerí (TAS Corporation, New York, USA) és 80 térf. % sóoldatot tartalmazó elegyben szuszpendálva a vizsgálati állatokban — a kontroll állatok kivételével — injektáltuk intraporitoneálisan. Az eredményeket az NCI értékelte az átlagos túlélési idő alapján. Az értékelés módját a későbbiekben, a táblázatokhoz kapcsolt megjegyzésekben részletesebben ismertetjük. A neostatinra vonatkozó eredményeket az 1—4. táblázatokban, a MeCCNU-ra vonatkozóakat az 5—8. táblázatokban ismertetjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 1. táblázat Kísérlet sorszáma Nem Dózis/injekció mg/kg Túlélés (1. Megj.) Log pusztulás (2. Megj.) 1. N 100,00 3,6 Toxikus 2. N 50,00 6/6 5,94 3. N 25,00 6/6 5,94 4. N 12,50 6/6 3,57 5. N 6,25 6/6 1,67 1. kontroll N 0 30/30 — 6. H 100,00 6/6 5,94 7. H 50,00 6/6 5,94 8. H 25,00 6/6 3,29 9. H 12,50 6/6 2,16 10. H 6,25 6/6 0,66 2. kontroll H 0 24/24-3
