185920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
1 2 185 920 oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot kovasavgélen kromatografáljuk, az eluálást diklór-metán és metanol elegyével végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk és a cím szerinti terméket kapjuk; [a]“ = -7° (c = 0,9, N,N-dimetil-formamidban). d) H-Phe-(D)Trp-Lys/Boc)-Thr-OMe 1,2 g Z-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe-t 50 ml metanolban 10%-os palládiumszén jelenlétében hidrogénezünk, és az oldatot szűrjük, vákuumban bepároljuk és a cím szerinti vegyületet kapjuk hab alakjában; [aj^ = — 18° (c = 1, metanolban). e) Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH Boc-(D)Phe-OH 16 g-ját 300 ml tetrahidrofuránban oldjuk, — 20°-ra hűtjük és 8,4 ml trietilamint, majd 8,3 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk hozzá. A kapott elegyet 10 percig keverjük - 15°-on, és H-Cys-(MBzI)-OH és 11,5 ml trietilamin 400 ml tetrahidrofurán és víz 5:1 arányú elegyében készült hideg oldatát csepegtetjük hozzá. A reakcióelegyet kb. 2 napig keverjük 0°-on, vákuumban bepároljuk, 1,3 liter vízzel hígítjuk és éterrel extraháljuk. A vizes fázis pH-ját 4 n kénsavval 2,0-ra állítjuk és a csapadékot etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot kovasavgélen történő kromatografálással tisztítjuk, eluálószerként I % ecetsavat tartalmazó étert használunk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk; [ujjj0 = -18°, (c = 1,1, N,N-dimetilformamidban). f) Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys ( Boc)- Thr-OMe 0,67 g Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH, 1,0 g H-Phe(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe és 0,5 g HOBT 30 ml N,N-dimetil-fomiamiddal készült és -20°-ra hűtött oldatához keverés közben 0,30 g diciklohexilkarbodiimidet adunk. A reakcióelegyet kb. 12 óra hosszat keverjük — 5° és 0° közötti hőmérsékleten és kb. 4 óra hosszat szobahőmérsékleten. A kivált diciklohexil-karbamidot szűrjük, a szűrletet 2 n citromsavval, 10%-os kálium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A terméket éterrel leválasztjuk, szűrjük és szárítjuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk; olvadáspontja 160°; [a]20 = — 30° (c = 1, metanolban). g) Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D) Trp-Lys(Boc)-Thr-NHNH2 0,9 g Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Boc)-Thr-OMe 15 ml N,N-dimetil-formamid-dal készült oldatához 1,5 ml hidrazin-hidrátot adunk. Az oldatot szobahőmérékleten hagyjuk állni 5 óra hosszat és vizes metanolt adunk hozzá. A csapadékot kiszűrjük, metanol és víz 1:9 arányú elegyével mossuk és szárítjuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk, amely 160°-on olvad; [a]p = - 19° (c = 1, N,N-dimetil-formamidban). h) H~Cys(MBzl)-Thr-ol-trifluor-acetát 7,1 g Boc-Cys(MBzl)-Thr-ol és 5 ml tioanizol 25 ml metilén-kloriddal készült oldatát 50 ml trifluor- 15 ecetsavhoz adjuk és 20 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot kb. 1,5 liter éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk; [a]p = 8,3° (c = 1, 95%-os ecetsavban). 20 i) Boc-Cys(MBzl)-Thr-ol 6,3 g Boc-Cys(MBzl)-OH 50 ml tetrahidrofurán- 25 nal készült és — 20°-ra hűtött oldatához 2,1 ml N- metil-morfolint adunk keverés közben, majd - 15°on 2,4 ml klór-hangyasav-izobutilésztert csepegtetünk hozzá. Az elegyet - 15°-on 5 percig keverjük, majd 3,3 g H-Thr-ol-hidroklorid és 4,1 ml N-metil- 30 morfolin 30 ml N,N-dimetil-formamidban készült és - 10°-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet két óra hosszat keverjük 0°-on és további két óra hosszat szobahőmérsékleten. 50 ml 10%-os kálium-hidrogén-karbonát oldat hozzáadása után az 30 elegyet vákuumban bepároljuk, etil-acetáttal hígítjuk, 3 x 2 n citromsavval, 3 x 10%-os kálium-hidrogén-karbonát oldattal és azután 30%-os nátriumklorid oldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepá- 40 roljuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk olaj alakjában, [a]“ = -31° (c = 1,3, N,N-dimetilformamidban). j) Boc-(D)-Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)-Trp- 45 Lys( Boc)-Thr-Cys( MBzl)-Thr-ol 0,82 g Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Boc)-Thr-NH-NH2 30 ml N,N-dimetil-formamiddal készült és - 20°-ra előhűtött oldatához 0,7 50 ml kb. 5 n éteres hidrogén-kloridot adunk keverés közben, majd egy részletben 0,8 ml, 10%-os N,N- dimetil-formamidos terc-butil-nitrit oldatot. Az elegyet 15 percig keverjük — 20° és — 15° közötti hőmérsékleten, majd 0,56 ml trietil-amint és 0,51 g 55 H-Cys-(MBzl)r-Thr-ol-hidroklorid 3 ml N,N-dimetil-formamiddal készült, - 15°-ra előhűtött oldatát adjuk hozzá - 25°-on és az így kapott elegyet 20 órán át keverjük - 5° és 0° közötti hőmérsékleten, majd további 3 órán át szobahőmérsékleten. A re- 60 akcióelegyet kb. 100 ml metanollal hígítjuk, a termék kb. 40 ml víz hozzáadásakor kiválik. A csapadékot szűrjük, vizes metanollal mossuk és szárítjuk, így a cím szerinti vegyületet kapjuk, amely 170°-on bomlik; [a]TM = -20 (c = 1, N,N-dimetil-forma- 65 midban). 4
