185685. lajstromszámú szabadalom • Eljárás őj cefem-karbonsav-származékok előállítására
1 185 685 2 phylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, Excherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Shigella dysenteriae, Shigella sonnei, Shigella flexneri, AlcaJigenes faecalis, Klebsiella aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Salmonella Heidelberg, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis és Neisseria gonorrhoeae baktériumokkal szemben in vitro sorozathígításos módszerrel vizsgálva például 0,01 és 50 pg/ml mennyiségben és in vivo egerekben, például kb. 0,1 és 100 mg/kg állat-testsúly mennyiségben adagolva kifejtett gátló hatás mutatja. A vegyület ezért gyógyászati felhasználásra, például antibakteriális antibiotikumként, különösen Gram-negatív baktériumok ellen javallható. A javasolt napi dózis 1—6 g, általánosabban 3—6 g. Kívánt esetben 250—3000 mg-ot, általánosabban 1000—3000 mg-ot tartalmazó dózisegységek formájában vagy nyújtott hatású formában adagolható. Emellett a hatás mellett az I képletű vegyület szinergetikus hatást fejt ki a polymorphonuclearis leucocytákra (PMNs). így, ha egy E. coli-val fertőzött egyednek találmány szerinti vegyületet adagolunk, már a gátló hatást kifejtő mennyiségénél kisebb mennyiségben is jelentősen megnöveli a PMNs pusztító hatását. Ezt a hatást feltehetően az okozza, hogy a vegyület megváltoztatja a baktérium felületét. A cefalosporinokkal kapcsolatban ezt a hatást korábban nem ismerték. Az elmondottakat in vitro szemléltethetjük, ha exponenciális növekedési fázisban lévő baktérium tenyészeteket a vizsgálandó anyag különböző mennyiségeivel (beleértve a gátló szint alatti mennyiségeket is) opszonikálunk és 30 perces, 37 °C-on való inkubálás után ezeket a tenyészeteket nyúl PMNs tenyészetekkel hozzuk össze, és 1 órával később összehasonlítjuk a megmaradó sejtek számát a kezdeti és kezeletlen tenyészetekben lévő sejtek számával. In vivo a hatást úgy vizsgáljuk, hogy egér csoportokat különböző baktériumokkal fertőzünk és meghatározzuk az adagolt vizsgálandó anyag egerekre gyakorolt hatását, mimellett baktériumonként és anyagkoncentráció-értékenként alkalmazott két egércsoport egyikét előzőleg az immuncsökkentő Cyclophosphamiddal kezeljük, hogy a működő PMNs sejtek száma a normálisnak maximálisan 10%-ára csökkenjen. Az I képletű vegyületet szabad sav vagy gyógyászatiig elfogadható bázissal képezett só vagy gyógyászatiig elfogadható szolvát formájában alkalmazhatjuk, amelyek a szabad savval megegyező hatásúak. Alkalmas sók az alkáli- vagy alkáliföldfém- és ammónium- vagy aminosavakkal képzett sók. Megfelelő szolvátok például a hidrátok és etanolátok. A vegyületeket hagyományos, gyógyászatiig elfogadható hígítókkal és hordozókkal keverhetjük és például tabletták vagy kapszulák formájában vagy különösen parenterálisan adagolhatjuk. Az ilyen készítmények előállítása szintén a találmány tárgyát képezi. A találmány ezért baktériumok elpusztítására szolgáló módszerre — ami abból áll, hogy ilyen kezelésre szoruló egyednek az I képletű vegyületnek vagy bázissal képzett gyógyászatiig elfogadható sójának vagy gyógyászatiig elfogadható szolvátjának hatásos mennyiségét adagoljuk —, és ilyen vegyuletek gyógyszerként, különösen antibakteriális hatású antibiotikumként való alkalmazására is vonatkozik. A következő példák a találmány bemutatására szolgálnak. Minden hőmérsékleti értéket Celsius-fokban adunk meg. I. példa 7-[(Karboxi-metoxi-imino)-lH-pirazol-3-il-acetil]-amino-3-dezacetoxi-3-(l-metil-lH-tetrazol-5-il-tio)cefalosporánsav (szín-izomer; 1. vegyület) a(i) 7-[(terc-Butoxi-karbonil-metoxi-imino)-lH-piruzol- 3 -il -acetil ]-amino- 3 -dezacetoxi- 3 - (1-metil-lH-tetrazol-5-il-tio)cefalosporánsav (szín-izomer) 11 g (terc-butoxi-karbonil-metoxi-imino)-lH-pirazoI-3-il-ecetsavat (szín-izomer) 19,8 g 2,2’-ditiodipiridinnel 200 ml vízmentes diklór-metánban szuszpendálunk, és keverés közben 24 g trifenil-foszfin 200 ml vízmentes diklór-metánnal készült oldatával elegyítjük. Az adagolás befejezése után a keverést további 4 óra hosszat folytatjuk szobahőmérsékleten. Eközben 14 g 3-dezacetoxi-3-(l-metil-lH-tetrazol-5-il-tio)~cefalosporánsavat 7,15 ml 1,5 diazabiciklo[5.4.0]undec-5- én segítségével 200 ml vízmentes diklór-metánban oldunk. A két oldatot egyesítjük, és 15 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 500 ml etil-acetát és 100 ml víz elegyével felvesszük, a fázisokat elválasztjuk, és a vizes fázist 10 x 100 ml etil-acetáttal mossuk, majd az etil-acetátot elöntjük. A megmaradó vizes fázist aküvszéner. derítjük és tömény sósavval pH 1,5-re savanyítjuk. Az oldatot etil-acetáttal gondosan extraháljuk, az extraktumot megszárítjuk, és az oldószer lepárlása után olajos maradékot kapunk, amely 100 ml éterrel való eldolgozás után szűrhetővé válik. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja bomlás közben í55°C. NMR spektrum (DMSO): (9,45 m3d, 9 Hz, 1H); 7,78 (d, 2,1 Hz, 1H); 6,5 (d, 2,7 Hz, 1H); 5,87 (dd, 9 Hz, 4,8 Hz, 1H); 5,18 (d, 4,8 Hz, 1H); 5,59 (s, 1H); 4,42 (d, 13 Hz, 1H); 4,23 (d, 13 Hz, ÍH); 3,95 (s, 3H); 3,82 (d, 13 Hz, 1H); 1,44 (s, 9H). a(ii) 7-[(Etoxi-karbonil-metoxi-imïho)-ÏH-pirazol-3-il -acetil]-amino-3 -dezacetoxi-3 - (1-metil-lH-tetrazol-5-il-tic)cefalosporánsav (szín-izomer) Ezt a vegyületet az a(i) eljárás szerint vagy a következőképpen állíthatjuk elő: (i) 7,85 g trifenil-foszfin, 10 g bisz(benztiazolil)-diszulfid és 62,5 ml metilén-klorid elegyét 20—25 °C-on egy éjszakán át keverjük. Az elegyet ezután 0—5 °C- ra hűtjük, és 6,025 g (etoxi-karbonil-metoxi-imi-no)-lH-pirazol-3-il-ecetsavat adunk hozzá részletekben, ügyelve arra, hogy a hőmérséklet ne emelkedjen 5° fölé. Az adagolás befejezése után az elegyet 0,5 °C- on 4 óra hosszat keverjük. (ii) 8,05 g tetrazolil-ACA-t 62,5 ml metilén-kloridban szuszpendálunk, vízhűtés közben cseppenként 650 ml bisz(trimetil-szilil)-acetamidot adunk hozzá. Az elegyet 20—25 °C-on addig keverjük, míg a tetrazolil-ACA feloldódik (kb. 3 óra). A kapott oldatot — 10°-ra hűtjük és a fentebb előállított aktív észtert hozzáadjuk. A keverést 0—5°-on még 4 óra hosszat folytatjuk, majd az elegyet éjszakán át 3°-os hideg szobában állni hagyjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
