185652. lajstromszámú szabadalom • Eljárás riboflavin mikrobiológiai úton történő előállítására
I 185 652 2 Táblázat Jellemző WNlIGenetika—304 törzs WNlIGenetika—304a törzs Mikroszkóp alatti morfo- 2—3 pm hosszú spóraképző gram-pozitív bacilus lógia Morfológia különböző táp- 28—37 °C hőmérsékleten a növekedés 1—2 napján 3—4 mm átmérőjű csillagszerű közegekben tenyészeteket képez, ezeknek széle nem sima, felülete sima, fényes, sárgás színű Hùs-pepton-agar (FPA) a szag alapján mérsékelt növekedés, főleg a táptalaj felületén Hús-pepton-bouillon a növekedés rázás nélkül a folyadék felületén film formájában történik (FPB) Szúrt tenyészet minimál a növekedés 2. napján 2—3 mm átmérőjű a minimál táptalajon növekedés nincsen táptalajon, glükózzal tenyészeteket képez, világossárga színű, ultraibolya sugárzás hatására sárgán fluoreszkál, a tenyészetek kerekek, szélűek sima, fényesek Fiziológia tulajdonságok 20—42 °C hőmérsékleten (optimum 37 °C) növekszik, a pH-érték 5,0—9,0 (optimum 7,0—8,0) szénforrások: jól hasznosítja a glükózt, szacharózt, keményítőt alkoholok: az etanolt és a szorbitot hasznosítja nitrogénforrások: jól asszimilálja az ammóniumsókat, karbamidot, nitrátot a zselatint elfolyósítja A találmány szerinti eljárást általánosságban a következők szerint hajtjuk végre. A WNlIGenetika—304 és WNlIGenetika—304a törzseket az oltóanyag előállítása céljából 1—2 napig 30 agarizált Hottinger-tápközegben (Birger M. O.: Szpravocsnyik po mikrobiologicseszkim i viruszologicseszkim metodam iszledovanyija, Moszkva, Medicina, 1973) vagy hús-pepton-agaron (FPA) tenyésztjük 28—37 °C hőmérsékleten. A sejtszuszpenziót ezután 35 melaszt, a takarmányélesztő száraz biomasszáját és ásványi sókat tartalmazó tápközegbe vagy tisztított burgonyadarabokat vagy hús-pepton-bouillont tartalmazó, lombikban elhelyezett tápközekbe visszük. Az oltóanyagot 200 ford/perc sebességű rázóasztalon te- uo nyésztjük 17—24 órán keresztül. Az oltóanyag 5_10%-át ezután a főfermentációs tápközegbe visszük. A fermentációt Erlenmeyer lombikban rázóasztalon végezzük 46—50 órán keresztül, 37 °C hőmérsékleten, 6,5—7,5 pH-érték (a fermentáció kezde- 45 tén) mellett. Az alkalmazott tápközeg szénforrásokat — például glükózt, szacharózt, nyers cukrot, melaszt, keményítőt — ásványi nitrogénforrásokat — például ammóniumsókat, karbamidot, nitrátot —, foszforsókat — például kálium-foszfátot, ammónium-foszfá- 50 tot és egyéb sókat —, mangánsókat — például mangán-diklorodot, mangán-szulfátot —, valamint növekedést elősegítő anyagokat, például a takarmányélesztő biomasszáját, takarmányélesztőhidrolizátumot és -autolizátumot, étkezési élesztőt, élesztőkivo- 55 natot, kukorica- és szójalisztet, kukoricalekvárt, kazeinhidrolizátumot, peptont tartalmaz. 46—50 órás fermentáció után a tenyészfolyadékban 700—1000 mg/1 riboflavin található. A riboflavin előállítására szolgáló találmány szerin- 59 ti eljárásban a megadott törzsek alkalmazásával 46—50 óra alatt szintetikus vagy komplex tápközegben lombikban való tenyésztés során a tenyészfolyadékban 1000 mg/1 mennyiségű riboflavin keletkezik, amely 40%-kal nagyobb aktivitást jelent, mint a 95 3 900 368 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint alkalmazott B. subtilis tenyészet aktivitása. A találmány szerinti törzsek ezen felül egyszerű, nem drága komponenseket tartalmazó tápközegben jól tenyészthetők. A találmány szerinti eljárást összehasonlítva azzal az eljárással, amelyben a riboflavin előállításához termelőként az E. ashbyi gombát alkalmazzák, megállapíthatjuk, hogy a fermentáció meggyorsulása következtében a találmány szerinti eljárás 1,5—2-szer gazdaságosabb, mivel a baktérium-tenyészetek gyorsabban nőnek, mint a gombatenyészetek. Nem lebecsülendő az sem, hogy a B. subtilis tenyészet érzékenysége az idegen mikroflórákkal szemben — összehasonlítva gombák érzékenységével — kisebb, ami különösen azért fontos, mert így nem szükséges a fermentációs tápközeghez antibiotikumot adni, és ez az ipari méretekben végrehajtott eljárást lényegesen olcsóbbá teszi. Találmányunkat a következőkben példákkal mutatjuk be. 1. példa Ferde hús-pepton-agaron (FPA) tenyésztett 24 órás B. subtilis WNlIGenetika—304 tenyészetet 6°!o melaszt, 1% takarmányélesztő száraz biomasszát és a következőkben megadott ásványi sókat tartalmazó folyékony oltó tápközegbe oltunk be. (Az oltó tápközeget a főfermentációs tápközeg steril vízzel kétszeresre történő hígításával nyerjük. A főfermentációs tápközeg összetételét a következőkben adjuk meg.) Az oltóanyagot 750 ml-es Erlenmeyer lombikban (a közeg térfogata 25—100 ml) 200 ford/perc sebességű rázóasztalon 17 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten tenyésztjük. A kapott oltóanyagot 5 °7o mennyiségben a következő összetételű főfermentációs tápközeghez adjuk: 3
