185619. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás tiszta klavuánsav, valamint gyógyászatilag elfogadható sói és észterei előállítására
1 185 619 2 A találmány tárgya új eljárás tiszta klavulánsav, valamint gyógyászatiig elfogadható sói előállítására. A klavulánsav az I képlettel ábrázolható. Az 1 508 977 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban többek között ismertetik, hogy a klavulánsav sói úgy állíthatók elő, hagy szűrt fermentlében található klavulanát-aniont anioncserélő gyantán adszorbeáltatnak, a gyantát egy elektrolittal eluálják, a kapott oldatot sómentesítik, a sómentesített oldatot felviszik egy második anioncserélő gyantára, ezt azután kromatográfiásan eluálják egy elektrolittal, az így kapott oldatot sómentesítik és végül az oldószert eltávolítják belőle. Ez az eljárás ugyan felhasználható elfogadható mennyiségű tiszta anyag előállítására, azonban a gyanta-oszlopok használata jelentős beruházást kíván, továbbá ezek a gyantaoszlopok nagyüzemi méretű termelés esetén csökkenthetik a termelési kapacitást. Ezért kívánatos lenne olyan alternatív módszer, amely nem,vagy csak kis mértékben venne igénybe ioncserélő gyantát hasznosító lépést. Az 1 543 563 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban eljárást ismertetnek a klavulánsav előállítására a lítium-klavulanát kicsapása útján. Felismertük, hogy a klavulánsav nagy tisztaságban állítható úgy elő, hogy terc-butil-aminnal alkotott sója formájában különítjük el. Ez a só ugyanis nagy tisztaságban nyerhető ki. A klavulánsav terc-butil-aminnal alkotott sója meg van említve a 862 211 számú belga szabadalmi leírásban, azonban csak mint gyógyászati készítményekhez alkalmazható komponens. A találmány szerinti eljárás tehát abban áll, hogy (i) nyers klavulánsavai szerves oldószerben terc-butilaminnal reagáltatunk, adott esetben aceton jelenlétében, majd (ii) a klavulánsav így képződött tere butil-aminsójáí elkülönítjük, és végül (iii) a terc-butil-aminsót ismert módon klavulánsawá vagy annak valamelyik gyógyászaíilag elfogadható sójává alakítjuk. A találmány szerinti eljárással előállítható klavulánsav-sók vonatkozásában utalunk az 1 508 977 számú nagy-britanniai és a 173 700 számú magyar szabadalmi leírásokra, vagyis tulajdonképpen a találmány szerinti eljárással előállítható sók az ezekben a szabadalmi leírásokban ismertetettsók. A klavulánsav különösen előnyösen alkalmazható sói közé tartoznak a gyógyászatiig elfogadható alkálifém- és alkáliföldfémsók, például a nátrium-, kálium-, kalcium- és magnéziumsók. Ezek közül a sók közül a leggyakrabban a nátrium- és a káliumsó kerül felhasználásra és az utóbbi a leginkább előnyös. A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként tetszőleges eredetű nem tisztított klavuiánsavat, illetve a nem tisztított klavulánsav forrásaként bármely, klamlanátot termelő mikroorganizmust használhatunk, és az ilyen mikroorganizmusok fermentálásával kapott fermentleveket az oldószeres extrahálást megelőzően bármely hagyományos módon, például az 1 508 977 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban leírtak szerint kezelhetjük. A klavulánsav terc-butil-aminsóját úgy állítjuk elő, hogy a klavuiánsavat terc-butil-aminnal, illetve -szabatosabb nomenklatura szerint — 2-amino-2-metil-propánnaÍ reagáltatjuk. Ezt a reagáltatást egyszerűen úgy hajthatjuk végre, hogy a nem tisztított klavulánsav szerves oldószerrel készült oldatához hozzáadjuk a terc-butil-amin szerves oldószerrel készült oldatát. A klavulánsav szerves oldószeres oldatát a klavulánsav megsavanyított vizes oldatának extrahálása útján állíthatjuk elő. A vizes oldat pH-ja az extrahálást megelőzően előnyösen 1 és 3 között van. Az extrahálást előnyösen 5 °C és 15 °C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. Jó eredmények elérése céljából a vizes oldatnak legalább mintegy 25 mg/ml, előnyösen mintegy 100 mg/ml klavuiánsavat kell tartalmaznia. Az extraháláshoz felhasznált vizes oldatot egyszerűen fermentléből nyerhetjük úgy, hogy a fermentléből a klavulanát-aniont anioncserélő gyantán adszorbeáltatjuk, a gyantát egy elektrolit vizes oldatával eluáljuk, a kapott vizes oldatot adott esetben sómentesítjük, és végül a vizes oldatot megsavanyítjuk. A nem tisztított klavulánsav és a terc-butil-amin reagáltatásához célszerűen felhasználható szerves oldószerek közé tartoznak a II általános képletű oldószerek - a képletben R8 1-6 szénatomot tartalmazó alkilvagy 1—6 szénatomot tartalmazó alkoxiesoportot és R9 1-6 szénatomot tartalmazó alkilcsoportot jelent. További célszerűen felhasználható oldószerek az éterek, például a tetrahidrofurán vagy a dioxán. A találmány értelmében azonban alkalmazható ilyen oldószerek elegye is. Még célszerűbben a reagáltatáshoz azt a szerves oldószert használjuk, amelyet a megsavanyított vizes oldat közvetlen extrahálására hasznosítottunk. E célra használhatjuk az etil-acetátot, metil-acetátot, propil-acetátot, n-butil-acetátot, nretil-etil-ketont, metil-izobutil-ketont, tetrahidrofuránt vagy ezek elegy ét. Ezek közül az oldószerek közül a legcélszerűbb ameíil-izobutil-keton, metiletil keton és az. etil-aceíát használata, A különösen alkalmas oldószerelegyek közé tartozik a metil-etil-keton ás a metil-izobutil-keton, továbbá a tetrahidrofurán és a metil-izobutil-keton elegye. A leginkább előnyös oldószer az etil-acetát. A terc-butil-amin oldására alkalmas oldószerek közé tartozik az aceton, etil-acetát, metil-izobutil-keton és a metil-etil-keton. Ezek közül az aceton a leginkább előnyös. Vizsgálataink során megállapítottuk, hogy a találmány szerinti eljárás végrehajtható az oldószerben, vagy oldószerelegyben lévő kis mennyiségű víz jelenlétében is. Általában 0-7 térfogat % víz lehet jelen, előnyösen azonban a víz mennyisége 4 térfogatinál kevesebb. Még célszerűbben azonban a klavulánsav oldatát szárításnak vetjük alá, ehhez a művelethez például magnézium-szulfátot használva. Általában egy mólekvivalens terc-butil-amint vagy csekély fölöslegét használjuk a megfelelő klavulánsavsó előállításához. Az oldatokat általában lassan, keverés közben keverjük össze, majd a reakcióelegyet az adagolás befejezése után még egy ideig keverjük. A klavulánsav előállítani kívánt terc-butil-arninsója ezután elkülöníthető. Ilyen módon a klavulánsav terc-butil-arninsója gyakorlatilag az összes szennyezőjétől elválasztható. Az elkülönítést hagyományos módon, például centrifugálás és a fölülúszó foiyadékfázis ezt követő eltávolítása útján végrehajthatjuk. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja értelmében a klavulánsav terc-butil-aminsóját acetonnal alkotott szolvátja formájában különítjük *5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
