185535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új gonadoliberin-származékok előállítására
1 2 majd 10 ml telített nátriumkorid oldattal mossuk, ezután szárazra pároljuk, éterrel eldörzsoljük. 1,54 g nyers terméket nyerünk. A nyers terméket szilikagél oszlopon (2,6 cm x 88 cm) kromatografáljuk etilacetát—piridin— —ecetsav—víz 240:20:6:11 arányú elegyét használva elu- 5 ensként. Harminc percenként kb. —4 ml-es frakciókat gyűjtünk, az eluciót vékonyrétegkromatográfiával követjük, az azonos Rf-ü frakciókat összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk, éterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk. Termelés: 1,04 g (65,5%) in R, = 0,42 Op: 172-174 °C [a]“ = -28,5° (c=l, MeOH) b) H-D-Thx-Leu-Arg-Pro-NHEt • 2HF , 5 Molekulasúly = 1210,1 253 mg (0,192 mmol) BOC-D-Thx-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt tetrapeptidet szuszpendálunk 3 ml anizolban, majd —80 °C-on 25 ml hidrogén-fluoridot kondenzálunk rá teflon reakcióedényben. Ezután 60 percen át 0 °C-on ke- 20 verjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláljuk. A viszszamaradó anizolos oldathoz kb. 50 ml abszolút étert öntünk. erőteljesen keverjük 10 percig, majd a kicsapódott szilárd anyagot szűrjük, éterrel többször mossuk és nátnum-hidroxid felett szárítjuk. 25 Termelés: 230 mg (98%) Op: 224-227 °C [a]” = -42,1° (c=l, MeOH) Rf (Etilacetát—piridin—ecetsav—víz, 45:20:6:ll-es rendszerben) — 0,35 30 Jódtartalom (elméleti): 41,9% talált: 43,0% c) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Thx-Leu-Arg-Pro-NHEt Molekulasúly = 1850 35 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapetidet oldunk 5 ml dimetil-formamidban, —10 °C-ra hűtjük, és keverés közben 280 1116 n sósavat, majd 31 mg NaN02 tömény vizes oldatát csepegtetjük hozzá. 10 perc elteltével hozzáadjuk 480 mg (0,4 mmol) H-D-Thx-Leu-Arg-Pro-NHEt. 2HF 40 só 2 ml dimetil-formamidban 280 pl trietilamin jelenlétében készített és lehűtött oldatát. A reakcióelegy pH-ját szükség esetén további trietilaminnal semlegesre állítjuk, 1 órán át —5°-on, 1 órán át 0-on keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. A dimetil-formamidot 45 vákuumban eltávolítjuk, a maradékot Sephadex G-25 oszlopon (2 cm x 65 cm) 10%-os ecetsav oldatban kromatografaljuk. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Termelés: 165 mg (22%) 50 A kapott anyagot tovább tisztítjuk. Szilikagél oszlopon (2 cm x 60 cm) az oszlopot 90:20: :6:24 arányú n-butanol—piridin—ecetsav—víz oldószereleggyel ekvilibráljuk, és az anyagot is ezzel az eleggyel eluáljuk. 30 percenként kb. 4 ml-es frakciókat gyűjtünk, 55 az eluciót vékonyrétegkromatográfiával követjük az azonos Rf-ü frakciókat összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk, éterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk. Termelés 150 mg Rj = 0,7 Rf (n Butanol—piridin—ecetsav—víz, 60 90:20:6:24 rendszerben) = 0,5 185 5 6. példa D-Thy6-Gonadoliberin-( 1 -9)-etilamid előállítása Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Thy-Leu-Arg-Pro-NHEt Molekulasúly = 1346,3 128 mg (0.07 mmol) D-Thx6-gondoliberin-l—9)-etilamidot (5. példa c pont) feloldunk 10 ml dimetil-formamid és 30 ml metanol elegyében. Ehhez 1 ml 1 n kaliumhidroxid-oldatot adunk, majd 500 mg Pd/CaC03 katalizátort (10% Palládium) adunk hozzá. A rekacióelegyet keverjük és intenzív áramban hidrogéngázt vezetünk át az oldaton 3 órán keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szűrőpapíron levő katalizátort háromszor átmossuk DMF-MeOH (1:3) elegyével, a szűrletet kevés ecetsavval pH=7 alá savanyítjuk majd szárazra pároljuk. A szilárd maradékot Sephadex G-25 oszlopon tisztítjuk (sómentesítjük) 50%-os ecetsavban. A megfelelő frakciókat öszszegyűjtjük és bepárlás után liofilizáljuk. Termelés: 55,0 mg (59,1%) Rf (Etilacetát—piridin—ecetsav—víz, 40:20:6:11 rendszerben) = 0,527 R* = 0,688 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X-Leu-Arg-Pro-Y (I) — amely képletben az aminosavak L konfigurációjúak, X jelentése D-tiroxil, D-tironil, D-4-klór-fenil-alanil, D-fenilalanil, D-4-3H-fenil-alanil vagy D-3’,513,5-3H-tironil csoport, és Y jelentése glicin-amid vagy 1—4 szénatomos alkil-amid csoport — nonapeptid-, illetve dekapeptid-amid és e vegyületek savaddíciós sóinak az előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) képletű Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 (II) pentapeptid-azidot valamely (III) általános képletű X-Leu-Arg-Pro-Y (III) — amely képletben X és Y jelentése a fenti — tetra- vagy pentapeptiddel kondezálunk, és kívánt esetben olyan (I) általános képletű nonapeptid és dekapeptid amidok előállítására ahol X jelentése D-4-3H-fenil-alanil, D-fenil-alanil, D-3’,513,5-3H tironil vagy D-tironil csoport és Y jelentése a fenti, a kapott olyan I általános képletű nonapeptid- vagy dekapeptid-amidot ahol X jelentése D-4- -klór-fenil-alanil, vagy D-tiroxil és Y jelentése a fenti, tricium gázzal vagy hidrogén gázzal katalizátor jelenlétében redukáljuk és a kapott nona-, illetve dekapeptid-amidot kívánt esetben gyógyászatilag elfogadható savval reagáltatva savaddíciós sóvá alakítjuk, vagy kívánt esetben a savaddíciós sóból bázissal reagáltatva felszabadítjuk a szabad bázist. 2. Eljárás luteinizáló és follikulusz-stimuláló hormonokat felszabadító tulajdonságú gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű gonadoliberin-származékot — ahol X és Y jelentése az 1. igénypont tárgyi körében megadott, — vagy annak gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóját a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó és/vagy vivőanyagokkal öszszekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 35 (Ábra nélkül
