185427. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormon-antagonisták előállítására
1 185 427 2 egy a-amino-védett glicint, célszerűen t-butil-oxikarbonilglicint, vagy valamely a-amino-védett D-alanint, célszerűen t-butil-oxikarbonil-D-alanint hozzákapcsolunk a benzhidrilamin gyantához valamely karboxil csoportot aktiváló vegyület, célszerűen diciklohexil-karbodiimid, vagy diizopropil-karbodiimid segítségével. Az a-aminovédett aminosavnak és a hordozógyantának összekapcsolása után az a-amino-védőcsoportot eltávolítjuk például trifluor-ecetsav metilén-kloridos oldatával, vagy trifluorecetsavval egyedül, vagy dioxánban oldott sósavval. A védőcsoport eltávolítása 0 °C és szobahőmérséklet között történik (például 20-24 °C-on). Az a-aminovédőcsoportok eltávolítására egy másik szabványos reagenst és a hozzátartozó reakció körülményeket E. Schroder és K. Lubke írták le „The Peptides” c. könyvben. Vol. 1., Academie Press, New York, 1965. pp. 72-75. Az a-amino védőcsoport eltávolítása után a visszamaradó a-amino-védett aminosavakat a kívánt sorrendben lépésről lépésre összekapcsolva megkapjuk a pepiidet. Az összes védett aminosavat kb. 3-szoros feleslegben juttatjuk be a szilárd fázisú reaktorba és az összekapcsolást metilén-klorid vagy dimetil-formamid és metilénklorid elegyében végezzük. Abban az esetben, ha az összekapcsolás nem teljes, az összekapcsoló folyamatot megismételjük, mielőtt az a-amino-védőcsoportot eltávolítanánk, mielőtt még a következő aminosavat hozzákapcsolnánk a szilárd fázisú reaktorhoz. Az összekapcsolási reakció eredményét a szintézis minden lépésében ninhidrin reakció segítségével ellenőrizzük, ahogy azt E. Kaiser és társai leírták az Analyt. Biochem., 34 595 (1970)-ben. Ily módon megkapjuk azt a (II) általános képletű vegyületet, amelyben X jelentése hidrogénatom. Miután a kívánt aminosav sorrendet szintetizáltuk, a pepiidet eltávolítjuk a hordozógyantáról alkalmas reagenssel, például hidrogén-íluoriddal kezelve, amely nemcsak a peptidet hasítja le a gyantáról, de lehasítja az összes, még visszamaradt oldallánc védő-csoportot is, és így közvetlenül megkapjuk azt az (I) általános képletű peptidet, amelyben X jelentése hidrogénatom, amennyiben az eljárásnál benzhidrilamin gyantát használtunk. Ha klórmctilczctt gyantát használunk, a peptidet valamely rövidszénláncű alkanollal, célszerűen metanollal vagy etanollal történő átészteresítés segítségével választhatjuk le a gyantáról. Ezután a kapott terméket szilikagélen kromatografáljuk és az összegyűjtött frakciót ammóniával kezelve a rövidszénláncű észtert, célszerűen a metil- vagy etil-észtert, C-terminális amiddá alakítjuk. Ily módon olyan (II) általános képletű vegyületeket kapunk, amelyekben X jelentése hidrogénatom. Az oldalláncot védő csoportokat ezután a fent leírt módon távolijuk el, például folyékony ammóniában oldott nátriummal való kezeléssel, vagy hidrogénfluorid segítségével, így megkapjuk az (I) általános képletű vegyületet, amelyben X jelentése hidrogénatom. Az olyan (I) általános képletű peptíd vegyületeket, amelyekben X jelentése hidrogén atomtól különböző, úgy kapjuk meg, ha a (II) általános képletű vegyületeket, amelyben X jelentése hidrogénatom, valamely alkalmas acilező szerrel aciíezzük. Ezután a fent leirt eljárás szerint lehasítjuk a hordozógyantát a kötő-csoporttal együtt, valamint az acilezett termék összes, még rajta levő oldallánc védő csoportjait is. Az olyan (11) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben X jelentése rövidszénláncú alkanoil-csoport, célszerűen valamely rövidszénláncú alkánsav-kloridot, vagy -bromidot vagy valamely rövidszénláncú alkánsav-anhidridet használunk acilező szer gyanánt egy szerves proton akceptor, például piridin, vagy imidazol jelenlétében. Hasonlóképpen ugyancsak valamely szerves proton akceptor jelenlétében készíthetjük el az olyan (11) általános képletű vegyületeket, amelyekben X jelentése HOOC-(CH2)n-CO vagy benzoilcsoport, ha az X csoportnak megfelelő sav-kloridot vagy sav-bromidot használjuk. Például ha olyan (II) általános képletű vegyületeket kívánunk készíteni, amelyben X jelentése HOOCCH2CH2CO- csoport, borostyánkősav-kloridot használhatunk. Az olyan (I) általános képletű peptid vegyületek, amelyben X jelentése hidrogénatom, szintén használhatók az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben X jelentése hidrogénatomtól különbözik azáltal, hogy az előbbi vegyületet a megfelelő acilező szerrel kezeljük. Bár az előzőkben a szilárd fázisú szintézist írtuk le az (1) általános képletű vegyületek előállítására, de ezeknek a vegyületeknek az előállítása a klasszikus oldószeres eljárással is megoldható. A következő példák tovább kívánják illusztrálni a találmány szerinti eljárást. A példákban az oldószer elegyekkel kapcsolatban megadott arányok az illető oldószerek térfogatának relatív arányait jelzik. 1. példa D - Fenihlanil - D - p - klór - fenilalanil - D - triptofil- L - seril(0 - benzil) - L - tirozil -D - triptofil - L - leucil-L-arginil-{bfi-tozH)-L-proUlglicil-benzhidrilamin-gyanta előállítása 1 g (0,5 mmol) benzhidrilamin gyantát helyezünk egy Beckman Model 990 típusú automata peptid szintetizáló reakció edénybe, melyet a következő műveletek elvégzésére programozunk be: a) metilénklorid; b) metilénkloridban oldott 33 %-os trifluor-ecetsav (2 részletben 1 és 25 percig); c) metilén-klorid; d) etanol; e) kloroform; f) 10 %-os tríetil-amin kloroformban (2 részletben mindegyik 3 percig); g) kloroform; h) metilén-klorid. A gyantát 263 g (1,5 mmol) t-butil-oxikarbonil-glicinnel keverjük metilén-kloridban majd 1,5 mmól diizopropil-karbodiimidet adunk hozzá, az elegyet szobahőmérsékleten 1 óráig keverjük, és az aminosav gyantát metilén-kloriddal, etanollal majd ismét metilén-kloriddal mossuk, (mindegyikkel háromszor). A védett, összekapcsolt aminosavat ezután végigvisszük a b,-től a h, lépéseken a fenti megadott program szerint. A következő aminosavakat (mindegyikből 1,5 mmol-t) kapcsolunk ezután hozzá egymás után az alábbi sorrendben: t-Boc-L-prolin, t-Boc-L-arginin(NG-Tos); t-Boc-L-Leucin; ■ -Boc-D-triptofán, t-Boc-L-tirozin, t-Boc-L-szerin(O-Bzl), ;-Boc-D-triptofán, t-Boc-D-p-klórfenil-alanin, t-Boc-D- fenilalanin. Az N-terminális t-Boc csoporttal befejezett gyantát eltávolítjuk, metanollal mossuk és csökkentett nyomáson szárítjuk. 1,42 g cím szerinti vegyületet kapunk. . 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
