185320. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-származékok előállítására
1 185 3 20 2 Analízis a C28H38Ns07Br (636,5) képlet alapján: számított: C:52,83%, H:6,02%, N: 11,00%; talált: C: 53,09%, H:6,13%, N: 11,18%. Aminosav-analízis: Alá, 0,99; Gly, 1,01; NH3, 1,04. 3. példa L tirozil-D-alanil-glicil-L-(N-etil)-m-bróm-fenil-alanin-amid ecetsavas sója [a]p = -8,3° (c = 0,5, 1 normál sósav). Analízis a C27H36N507Br (623) képlet alapján: számított: C:52,09%, H:5.83%, N: 11,25%; talált: C: 52,13 %, H:6,09%, N: 11,39%. Aminosav-analízis: Tyr, 1,01; Alá, 0,99, Gly, 0,99; NH3, 1,01. 4. példa L-(N-metil)-tirozil-D-alanil-giicil-L-(N-etil)-rn-metil-fenil-alanin-amid ecetsavas sója [a]p = +9,2° (c = 0,5, 1 normál sósav). Analízis a C29H4lN507 (571,7) képlet alapján: számított: C: 60,93%, H:7,23%, N: 12,25%; talált: C: 60,68%, H:7,00%, N: 12,46%. Aminosav-analízis: Alá, 0,98, Gly, 1,02; NH3, 0,96. 5. pclda L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-(N-etil)-m-klór-fenilalanin-amid ecetsavas sója [a]p = -13,7° (c = 0,5, 1 normál sósav). Analízis a C27H36NS07C1 (578,1) képlet alapján: számított: C: 56,10%, H:6,28%, N: 12,12%; talált: C: 55,84%, 11:6,37%, N: 12,35%. Aminosav-analízis: Tyr, 1,02; Alá, 0,99; Gly, 0,98; NHj, 0,88. 6. példa L-(N-Metil)-túozil-D-alanil-glicii-L-(N-etil)-m-klór-fenil-alanin-amid ecetsavas sója [a]p = -9,2° (c = 0,5. 1 normál sósav). Analízis a C28H38Nä07Cl (592,1) képiét alapján: számított: C;56,80%, H:6,47%, N: 11,83%; talált: C: 57,11 %, H:6,45%, N: 12,15%. Aminosav-analízis: Alá, 0,99; Gly, 1,00; NH3, 1,01. 7. példa L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-(N-etil)-m-jód-fenil-alaninamid ecetsavas sója [a]p = -14,0° (c = 0,5, 1 normál sósav). Analízis a C27H36N5CM (669,5) képlet alapján: számított: C: 48,44%, 11:5,42%, N: 10,46%; talált: C: 48,40%, 11:5,25%, N: 10,66%. Aminosav-analízis: Tyr, 1,01; Alá, 0,99; Gly, 0,99; NH3, 1,05. 8. példa L-Tirozil-D-alaníl-giicil-L-(N-ciklopropil-metil)-m-jódfenil-alanin-amid ecetsavas sója [a]p =+1,18° (c = 0,5, 1 mólos ecetsav). Anab'zis a €2^:381^5071 képlet alapján: számított: C: 50,08%, H:5,S1%, N: 10,07%; talált: C: 50,0%, H:5,22%, N: 10,23%. Aminosav-analízis: Tyr, 0,99; Alá, 1,01; Gly, 0,99; NH3, 0,95. 9. példa L-(N-Metil)-tirozil-D-alanil-glicíl-L-(N-ciklopropílmetil)-m-jód-fenil-alanin-amid ecetsavas sója 1 [a]pS =+0,787° (c = 0,5, 1 mólos ecetsav). Analízis a C3oH4oN507I képlet alapján: számított: C: 50,78%, H:5,68%, N:9,81%; talált: Ci 50,50%, H:5,40%, N:9,88%. Az I általános képletű vegyületek fájdalomcsillapító hatását egéren hot-plate-(fütőlapos)-módszerrel mutatjuk ki. E célból a kísérleti állatot egy függőlegesen álló, plexiüvegből készült hengerbe helyezzük, amelynek alaplapja egy 52 °C hőmérsékletre felmelegített fűtőlap. Az egereknek szubkután injekció formájában beadjuk a vizsgálandó anyag megfelelő mennyiségének valamely vivőanyaggal készült oldatát vagy szuszpenzióját, és az állatot 15 perc múlva rátesszük a fűtőlapra. Meghatározzuk azt a másodpercekben mért késleltetési időt, amelynek elteltével az egér felugrik a forró felületről. Ha valamely anyagnak fájdalomcsillapító hatása van, akkor ezt beadva hosszabb késleltetési időt mérünk, mint azoknál az egereknél, amelyek csak a vivőanyagot kapják. A mérést olyan dózistartományban kell végeznünk, amely dózis még nem zavarja meg az állatok mozgásának koordináltságát, és nem teszi őket mozgásképtelenné. Az alábbi táblázatban megadjuk a fent leírt módon mért ED5o-értékeket. Az EDS0-érték az a dózis, amelyben a vizsgált vegyület a vizsgált egerek 50%-ánál fájdalomcsillapító hatást mutat. Fájdalomcsillapító hatásként értékeljük azt, ha a vizsgált vegyületet beadva a kísérleti állat késleltetési ideje azonos vagy nagyobb, mint a kontroll állatok késleltetési ideje, plusz a standard szórás kétszerese. A fájdalomcsillapító hatás %-os értékeit probit-értékekké alakítottuk, és az ED5o-értéket a dózis-hatás adatpkból regressziós analízissel számítottuk ki. Minden egyes dózis-hatásgörbe legalább négy pontból áll, és minden egyes pontot legalább tíz kezelt és tíz kontroli-egér adataiból határoztuk meg. I. táblázat Fájdalomcsillapító hatás, hot-plate módszer Vegyület EDso, mg/kg 1. példa 1,2X 10 ~7 8 2. példa 0,003 3. példa 0,0049 4. példa 0,003 5. példa 0,0003 6. példa 0,0018 7. példa 0,0019 Ezenkívül az egyes 1 általános képletű vegyületek fizikai dependencia kapacitása csekély. Ezt egereken a spontán motoros aktivitás mérésével mutathatjuk ki. 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 H0 65 8
