185312. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminosav- és peptid származékok védőcsoportjainak eltávolítására cseppfolyós ammóniában fém nátriummal
185 312 2 ptunk anélkül, hogy a szuszpenzió megkéküll volna. A szokásos feldolgozást követően a vékonyréteg-kromatogramon 1-2% kiindulási Z-Asn-OH-t (Rj : 0,20) mutattunk ki a várt L-aszparagin mellett (Rf : 0). A pH 1,9-es pufferoldatban készített elektroforetogramon csak L-aszparagint mutattunk ki. b) 10 mmol Z-Asn-OH-t 30 mg atom fémnátriummal reagáltatva tartósan kék szuszpenziót kaptunk, amelyet a szokásos módon dolgoztunk fel. Vékonyréteg-kromatográfiásan Z-Asn-OH-t nem tudtunk kimutatni. A pH 1,9-es pufferoldatban készített elektroforetogramon pár százaléknyi L-homoszerinlaktont mutattunk ki a várt L-aszparagin és egy kevés azonosítatlan, erősen bázisos anyag mellett. 8. példa Az N-benziloxikarbonil-L-tirozinamid redukciója a) 6,5 mmol Z-Tyr-NH2-ot 13 mg fémnátriummal kezelve fehér szuszpenziót kaptunk. A szokásos feldolgozás során a pH 7-re állított vizes oldatból 0,26 mmol (4,0%) kiindulási Z-Tyr-NH2-ot nyertünk vissza. A pH 1,9-es pufferoldatban készült elektroforetogram szerint a reakcióban csak a várt H-Tyr-NH2 képződött. b) 6,5 mmol Z-Tyr-NH2 redukcióját 19,5 mgatom nátriummal végezve tartósan kék reakcióelegyet kaptunk, amelyet a szokásos módon dolgoztunk fel. A pH 1,9-es pufferoldatban készült elektroforetogramon a várt H-Tyr-NH2-on kivül körülbelül 1% L-tirozinolt is kimutattunk. 9. példa Az N-benziloxikarbonil-L-aszparaginil-glicinamid redukciója a) 5 mmol Z-Asn-Gly-NH2-ot 10 mg-atom fémnátriummal gyorsan elreagált és a reakcióelegy megkékülése nélkül fehér szuszpenzió képződött. A szokásos feldolgozást követően a vékonyrétegkromatogramon néhány százalék kiindulási ZAsn-Gly-NH2-ot (R/: 0,45) mutattunk ki. A pH 1,9-es pufferoldatban készült elektroforetogramon a várt H-Asn-Gly-NH2-on kívül pár százalék H- béta-Asp-Gly-NH2-o‘ ős a ninhidrines előhívás kimutatási határának mennyiségében H-Asp-Gly- NH2-ot mutattunk ki. b) 5 mmol Z-Asn-Gly-NH2-ot 15 mg-atom fémnátriummal reagáltatva kék szuszpenziót kaptunk, amely 35 perc alatt kifehéredett. A szokásos feldolgozást követően a pH 1,9-es pufferoldatban készült elektroforetogramon a várt H-Asn-Gly-NH2 mellett 10-20%-nyi H-béta-Asp-Gly-NH2-ot és H-Asp-Gly-NH2-ot mutattunk ki. 10. példa Oxitocin előállítása védett nonapeptidamidból a) Egy 2 literes háromnyakú gömblombikba, amelyet etanolfürdőben szénsavhóval hütöttünk, 8 1 liter fémnátriumról desztillált ammóniát csaptunk le. Amikor a kellő mennyiségű ammónia öszszegyült, a hűtést és a gázbevezetést megszüntettük, a mágneses keverést megindítottuk, majd egy adagolókapszulán keresztül 5-10 mg fémnátriumot adtunk az ammóniához. Az oldat legalább 5 percig tartó kék színe jelezte a vízmentes körülményeket. Az oldatba ezután 7,5 g (5,67 mmol) Z-Cys(Bzl)Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-G!y-NH2-ot szórtunk, majd feloldódása után 913 mg (39,7 mgatom, 7 g-atom/mol) nátriumot szórtunk az oldatba, A nátrium körülbelül 5 perc alatt elreagált, miközben az oldat nem kékült meg összefüggően. Ezután az ammóniát 20-30 °C-os fürdőn elpárologtattuk, majd a maradékot vákuumban ammóniamentesítettük. A visszamaradó fehér anyagot 6 liter ionmentes vízben oldottuk és a szokásos módon oxidáltuk. így összesen 1,88 millió NE (73,2%) oxtocint kaptunk (biológiai értékmérés és nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat alapján). Ez 329 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. h) 7 g-atom/mol fémnátriummal 15,0 g (11,34 mmol), illetve 75,0 g (56,7 mmol) védett nonapeptidamidot redukálva 315 NE/mg, illetve 331 NE/ mg oxitocint kaptunk. c) 7,5 g (5,67 mmol) védett nonapeptidamidot 1,43 g (62,2 mg-atom, 11 g-atom/mol) fémnátriummal az előzőekben leírt módon redukáltunk. A reakcióelegy 10 percre megkékült, majd fehér szuszpenzióvá alakult. Az oxidációt a szokásos módon végezve 1,49 millió NE (58,2%) oxitocint kaptunk. Ez 261 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. d) 7,5 g (5,67 mmol) védett nonapeptidamidot 2,01 g (87,4 mg-atom, 15 g-atom/mol) fémnátriummal kezelve az előzőekben leírt módon tartósan kék reakcióelegyet kaptunk. A nátrium fölöslegét ammónium-kloriddal reagáltattuk el. Ily módon 0,83 millió NE (32,2%) oxitocint kaptunk. Ez 145 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. 11. példa Oxitocin előállítása S,S'-dibenzil-oxitoceinből a) 6,74 g (5,67 mmol) S,S'-dibenzil-oxitoceint a szokásos módon 652 mg (28,35 mg-atom, 5 gatom/mol fémnátriummal reagáltatva víztiszta és a reakció során összefüggően nem megkékülő oldat képződött. Az oxidációt a szokásos módon végezve 1,65 millió NE (61,0%) oxitocint kaptunk. Ez 275 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. b) 6,74 g (5,67 mmol) S,S'-dibenzil-oxitoceint 913 mg (39,7 mg-atom, 7 g-atom/mol) fémnátriummal reagáltatva fehér szuszpenzió képződött. A szokásos módon oxidálva 1,28 millió NE (47,3%) oxitocint kaptunk. Ez 213 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. c) 6,74 g (5,67 mmol) S,S'-dibenzil-oxitoceint 1,17 g (51,0 mg-atom, 9 g-atom/mol) fémnátriummal reagáltatva pár percre megkékülő elegy képződött, amely fehér szuszpenzióvá alakult. így 0,64 millió NE (23,7%) oxitocint kaptunk. Ez 107 NE/mg biológiai aktivitásnak felel meg. 5 0 '5 20 25 20 25 40 45 50 55 60 65
