185264. lajstromszámú szabadalom • Javított mikrobiológiai eljárás androsztán szteroidok előállítására
1 2-185264 _ t 7. táblázat nyers tojássárgája (%) képződött 4AD (g) 0 0,20 0,2 0,30 0,5 0,39 1,0 0,44 2,0 0,50 4,0 0,41 8,0 0,27 tojássárgáját is tartalmaz. Mindegyik lombikot a fentiek szerint készített oltótenyészet 20 ml-nyi mennyiségével inokuláljuk. A főfermentációt 30 °C hőmérsékleten vezetjük le csoportonkénti egy lombikban 120 órán át, a másik lombikban 168 órán át, vibrációs rázógépen percenként 100 (7 cm kitérésű) lökettel rázva a közeget. Az így nyert fermentlevet 2,4 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumok 9a-OH-4AD célterméktartalmát gázkromatográfiával határozzuk meg, az eredményt a 9. táblázat mutatja. 9. példa A 6. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy szárított tojássárgája helyett a héjától megfosztott teljes tojás az adalék. Az eredményeket a 8. táblázat mutatja. 8. táblázat teljes tojástartalom (%) képződött 4AD (g) 0 0,20 0,5 0,29 1,0 0,35 1,5 0,40 3,0 0,47 5,0 0,50 10,0 0,38 10. példa 1,0% glükózt, 1,0% húskivonatot, 1,0% peptont és a fennmaradó részben vizet tartalmazó oltó tápközeget (pH = 7,2) készítünk. Ebből az oltó tápközegből 100 ml mennyiséget töltünk 500 ml űrtartalmú rázólombikba. A lombikot és tartalmát autoklávban 15 percen át 120 *C hőmérsékleten sterilizáljuk. A közeget oltókacsnyi M. fortuitum NRRL 13-8119-cei inokuláljuk, majd az inokulált közeget 48 órán át 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk, vibrációs rázógépen percenként 120 (7 cm kitérésű) lökettel rázva a közeget. Főfermentációs táptalajt készítünk (pH = 7,0) és azt autoklávban 20 percen át 120 °C hőmérsékleten sterilizáljuk. A táptalaj összetétele: 4,0% porított egész 0,8% szójababolaj szójabab 0,2% NaN03 0,2% K2HP04 0,1% MgS04 • 7H20 1,5% koleszterin a többi víz. Egyenként 6 liter ürtartalmú rázólombikok közül két (2) lombikba a fenti összetételű főfermentációs közegből 800 ml-t és további két (2) lombikba 800 ml olyan táptalajt töltünk, melynek összetétele és elkészítése egyébként egyező, de 1,0% szárított 9. táblázat Képződött 9a-OH-4AD mennyisége (g) inkubáció tartama (óra) tojássárgája adalék 120 168 Nincs 1.75 2,77 Van 2,88 3,28 11. példa A 10. példa szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy M. fortuitum NRRL B—8119 helyett M. sp. NRRL B-3683 tenyészettel inokulálunk. Az extraktumok ADD célterméktartalmát a 10. táblázat 30 mutatja. 10. táblázat 12. példa 45 A 10. példa szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy M. fortuitum NRRL B—8119 helyett M. sp. NRRL 13-3805 tenyészettel inokulálunk. Az extraktumok 4AD célterméktartalmát a 11. táblázat mutatja. 50 11. táblázat 60 Miután így teljes részletességgel ismertettük a találmányt, a szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti eljárást az itt leírtaktól eltérő módon foganatosíthatjuk a találmányi gon- 65 dolat adta kereten belül. 7
