185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
1 185 238 2 Elemi analízis a C29H4207NeS képlet alapján: számított: C 56,29% H 6,84% N 13,58% S 5,18% talált: C 56,56% H 6,81% N 13,40% S 4,93% 3. példa Z-Leu-Arg(MDS)-Pro-NHEt szintézise 70 ml metanolban feloldunk 3,16 g (0,0051 mól) Z-Arg(MDS)-Pro-NHEt vegyületet és ezt követően 969 mg (0,0051 mól) p-toluolszulfonsavat adunk az oldathoz. A katalitikus redukciót hagyományos módon palládiumkorom-katalizátor használata mellett végezzük. A katalizátort ezután szűréssel elkülönítjük és a szűrletet betöményítjük. A maradékot 30 ml dimetilformamidban oldjuk, ezután 30 ml (0,0051 mól) trietilamint adagolunk hűtés közben, majd további 2,40 g (0,0051 mól x 1,1) Z-Leu-ONB-t viszünk az oldatba. Az elegyet 12 óra hosszat keverjük. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot etilacetát^an oldjuk. Az elilacetátos réteget vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és 0,2 n HCl-oldattal mossuk, majd szárítjuk és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A maradékhoz étert adunk és a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, majd etilacetál-élerelegyből ismét kicsapjuk. Kitermelés 2,5 g, amely az elméleti hozam 67,0%-a. Op. 95-100 °C. Optikai forgalóképesség: [a]£3 22,0° (c = 0,6, dimetilformamid). TLC: Rf, = 0,50 Elemi analízis a C3jHj308N7S képlet alapján: számított: C 57,44% H 7,31% N 13,40% S 4,38% talált: C 57,60% H 7,29% N 13,15% S 4,28% 4. példa pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)Leu-Leu-Arg(MDS)Pro-NHEt szintézise 732 mg (0,001 mól) Z-Leu-Arg(MDS)-Pro- NHEt feloldunk 50 ml metanolban és a katalitikus redukciót szokásos módon palládiumkorom-katalizátor jelenlétében vitelezzük ki. A katalizátort szűréssel elkülönítjük és a szűrletet betöményítjük. A maradékot 10 ml dimetilformamidban oldjuk. Ebben az oldatban feloldunk 816 mg (0,001 mól) pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-OH-t és 717 mg (0,004 mól) HONB-t. Az oldatot - 10 °C-ra hűtjük jég-konyhasó keverékkel és utána 412 mg (0,002 mól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet — 10 °C-on 3 óra hosszat és 0 °C-on 10 óra hosszat, szobahőmérsékleten pedig 24 óra hosszat keverjük. A melléktermékként keletkező karbamidot kiszűrjük és a szűrletet vákuumban betöményítjük. A maradékhoz étert adunk, a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük és acetonitrilből ismét kicsapjuk. Kitermelés 1,15 g, amely az elméleti hozam 81,6%-a. Op. 105-110 °C (bomlik). Optikai forgatóképesség [a],7—28,2° (c = 0,6, dimetilformamid). TLC: Rf2 = 0,20. Elemi analízis a C68EI93O15N16ÍÍ • H20 képlet alapján: számított: C 57,33% H 6,72% N 15,73% S 2,25% talált: C 57,29°; H 7,18% N 15,32% S 2,02% 5. példa pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg-Pro- NHEt szintézise 0,5 ml tioanizol és 10 ml trifluorecetsav elegyében feloldunk 300 mg pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu- Leu-Arg(MDS)-Pro-NHEt vegyületet és az oldatot 50-55 °C-on 1 óra hosszat állni hagyjuk. A trifluorecetsavat csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a maradékhoz étert adunk és a keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük. A csapadékot kis mennyiségű vízben oldjuk és az oldatot egy 1,5 x 10 cm méretű Amberlile IRA-410 oszlopon átengedjük (acetát-forma). A távozó folyadékot és mosó-oldatokat egyesítjük és közvetlenül egy 1,5 x 12 cm méretű karboximelilcellulóz oszlopra visszük. Az oszlopot 50 ml vízzel mossuk és az eluálást lineáris-fokozatos módszerrel végezzük, amelynek során 500 ml vizet és 500 ml 6,9 pH-jú 0,15 mólos ammóniumacetát-oldatot / használunk. A fő frakciókat (240-390 ml) összegyűjtjük, liofilizáljuk és kis mennyiségű 1 n ecetsavban oldjuk. Az oldatot egy 2,5 x 120 cm méretű Sephadex IH-20 oszlopon átengedjük és az eluálást a fenti oldószerrendszerrel végezzük. A fő frakciókat (290-350 ml) összegyűjtjük és liofilizáljuk. Kitermelés 120 mg. Optikai forgatóképesség: [a]^-34,l° (c = 0,4, 5%-os ecetsav). TLC: Rf3 (n-butanol-piridin-ecetsavvíz = 30 : 20 : 6 : 24) = 0,56. Aminosav-analízis (acidolizis): His, 1,01(1); Arg +etilamin, 1,75(1 + 1); Trp, 0,90(1); Ser, 0,86(1); Glu, ,1,05(1); Pro, 1,04(1); Leu, 2,03(2); Tyr, 1,11(1); Átlagos kihozatal 85,0%. 6. példa pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(MDS)Pro-NHEt szintézise 476 mg (0,00065 mól) Z-Leu-Arg(MDS)-Pro- NHEt-et és 494 mg (0,00065 mól) pGlu-His-Trp- Ser-Tyr-Gly-OH-t használunk és a 4. példában leírt módon járunk el, így a cím szerinti vegyületet kapjuk. Kitermelés 710 mg, amely az elméleti hozam 80,9%-a. Op. 135-140 °C (bomlik). Optikai forgatóképesség: [a]^ — 26,7° (c = 0,5, dimetilformamid). Rf2 = 0,16 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
