185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
1 185 238 2 a találmány szerinti védőcsoportot sav segítségével eltávolítjuk. E védőcsoport eltávolítása érdekében a hagyományos savval való kezelést alkalmazhatjuk. Erre a célra a metánszulfonsavas módszert, a trifluormetánszulfonsavas módszert és a hasonló módszereket használhatjuk. Ezenkívül a találmány szerinti eljárás esetében a trifluorecetsavas módszer alkalmazását javasolhatjuk új savas kezelési módszerként. A védöcsoport eltávolítására irányuló reakciót nagyon kielégítő módon végezhetjük úgy, hogy tioanizol vagy anizol jelenlétében hajtjuk végre. A trifluorecetsavból és a tioanizolból vagy az anizolból előnyösen annyit használunk, amennyi elegendő oldószerként és a védöcsoport lehasítására. Ezekből például 1-105 egyenértéknyi, előnyösen 1-103 egyenértéknyi mennyiséget alkalmazunk egy mól védett guanidinocsoportot tartalmazó vegyületre számítva. A védőcsoport eltávolítását valamely oldószerben, így ecetsavban, kloroformban vagy metilénkioridban, — 10 °C-től 300 °C-ig, előnyösen körülbelül + 10 °C és + 100 °C közötti hőmérséklet-tartományban hajtjuk végre. A találmány szerinti eljárás alkalmazható guanidinocsoportot tartalmazó peptidek előállításánál. Ilyen peptidek például a fiziológiailag aktív peptidek, így a Dez-Gly'°-(D-Leuö)-LH-RH-etilamid (14 072/1978 számú közzétett japán találmányi bejelentés), Dez-Gly10-LH-RH-etilamid (24423/1978 számú közzétett japán találmányi bejelentés), a Tuftsin (Nature 228, 672, 1970), Substance P, Kyotorphin, és hasonlók. Más peptidek, így az MSH, ACTH, glucagon-secretin, bradykinin, dynorphin és a-neoendorphin, valamint ilyen peptidek aktív maradékai, szintén előnyösen állíthatók elő. Az (I) általános képletű helyettesített benzolszulfonil-csoport nem csak az előzőekben említett módon történő savas kezeléssel távolítható el a guanidinocsoportról, hanem ennél gyengébb savas kezeléssel is. A trifiuorecetsavval végzett gyenge savas kezeléssel nem távolíthatók el az eddig alkalmazott ismert guanidino-védöcsoportok, míg ily módon, azaz gyengén savas kezeléssel könnyen lehasíthatók az (1) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoporlok. A hagyományos eljárásoknál, amelyeknél a guanidinocsoport p-meloxibenzolszulfonil-csoporttal vagy mezitilénszulfonil-csoporttal van védve, és az ezt követő lehasítás metánszulfonsavval történik a peplidkondenzáció után, akkor szukcinimid típusú mellékreakció megy végbe, ha a peptid egy aszparagin- vagy aszparaginsav-maradékot foglal magában, vagy egy N—>0 savátrendeződési reakció játszódik le akkor, ha szerin- vagy tereoninmaradék van jelen. A találmány szerinti eljárás esetében, még akkor is, ha a peptid ilyen típusú aminosavmaradékokat tartalmaz, a védőcsoport könnyen eltávolítható gyengén savas így trifluorecetsavas, kezeléssel a fent említett mellékreakciók kialakulása nélkül. A találmány szuiuti eljárást a következőkben részletesen leírjuk kiviteli és kísérleti példákkal is. A leírásban az aminosavakat, peplideket, védöcsoportokat, aktivált csoportokat és az ezekhez hasonló csoportokat a IUPAC-IUB által ajánlott biológiai elnevezésekkel vagy a szakterületen általában alkalmazott rövidítésekkel jelöljük. A következőkben ilyen rövidítéseket sorolunk fel. pGlu: piroglulaminsav His: hisztidin Trp: triptofán Ser: szerin Tyr: tirozin Leu: leucin Gly: glicin Arg: arginin Pro: prolin Lys: lizin Gin: glutamin Phe: fenilalanin Met: metionin Thr: treonin (A fenti aminosavak L-aminosavak, amennyiben másként nem jelöljük azokat. A D-savakat fajlagosan jelöljük. A Gly kivétel) Z: benziloxikarbonil-csoport Boc: terc-butoxikarbonil-csoport HONB és ONB: N-hidroxi-5-norbornén-2,3- dikarboximid és észtere HOBt: N-hidroxibenzotriazol DCC: N,N'-diciklohexilkarbodiimid DCU: N,N'-diciklohexilkarbamid H2/Pd: katalitikus redukció TFA: trifluorecetsav CHA: ciklohexilamin OTCP: 2,4,5-triklórfenilészter OSu: N-hidroxiszukcinimidészter Et: etilcsoport A leírásban az (I) általános képletü helyettesített benzoiszulfonil-csoportokat a következő rövidítésekkel jelöljük: 4-metoxi-2,6-dimetilbenzolszulfonil = MDS 4-metoxi-2,3,6-trimetilbenzolszulfonil = Mtr pentametilbenzolszulfonil = Pme 2,4,6-lrimetoxibenzolszulfonil = Tms 4-metoxi-2,3,5,6-letrametilbenzolszulfonií —. Tmo /. példa (1) Z-Arg(MDS)-OH-CHA-só szintézise 150 ml 4 n NaOH oldat és 400 ml aceton elegyében feloldunk szobahőmérsékleten 46,2 g (0,15 mól) Z-Arg-OH-t és az oldatot jéggel hütjük. Az oldathoz egy óra ‘leforgása alatt hozzácsepegtetjük 70,7 g (0,30 mól) 4-metoxi-2,6-dimetilbenzolszulfonilklorid 150 ml acetonnal készített oldatát. Az clegyet 2 óra hosszal szobahőmérsékleten keverjük és szilárd citromsavat adunk hozzá avégett, hogy a reakció-oldatot savassá legyük. Az acetont ledesztilláljuk és a keletkező olajos anyagot etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos réteget vízzel kétszer mossuk és az előállítani kívánt vegyületet vizes rátriumhidrogénkarbonát-oldattal extraháljuk. A vizes réteget citromsavval megsavanyítjuk és a keletkező olajos anyagot etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos réteget alaposan átmossuk vízzel és szárítjuk, majd az etilacetátot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és így 63 g olajat kapunk. Ezt az olajat 300 ml etilacetátban oldjuk és ha kihűlt az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
