185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
1 2 25. példa (1) Z-Arg(Mlr)-Pro-Lys(Boc)-Pro-OH szintézise 30 ml metanolban feloldunk 0,59 g olajos Z-Pro- Lys(Boc)-Pro-OMe vegyületet, amelyet H-Pro- 5 OMe, Z-Lys(Boc)-ONB és Z-Pro-ONB sorozatos kondenzálásával állítunk elő. A katalitikus redukciót pailádiumkorom-katalizátor jelenlétében végezzük. A katalizátort szűréssel elkülönítjük, a szürletet betöményítjük és a maradékot 10 mi dime- 10 tilformamidban oldjuk. Az oldathoz hozzáadunk Z-Are(Mlr)-OH vegyületet (amelyet 0,56 g ZArg(Mtr)-OH.CHA-ból készítünk), 0,15 g HÖBt-t és 0.23 g DCC-t. Az elegyet szobahőmérsékleten keverjük 15 óra hosszat. A melléktermékként kelet- 15 kezö DCU-t szűréssel elválasztjuk és utána az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, valamint 0,2 n sósavoldattal mossuk, majd szántjuk és az oldószert ledeszlilláljuk. Ily módon olajos 20 maradékot kapunk, amely Z-Arg(Mtr)-Pro- Ly:;(Boc)-Pro.OMe vegyidet. Ezt a maradékot 10 ml metanolban oldjuk és 2 ml ! n vizes nátriumhidroxid-oldalot adunk hozzá. Az elszappanosítást szobahőmérsékleten 2 óra alatt végezzük el. 25 A reakűóelegyet 2 ml I n hidrogénkloridoldat hozzáadásával hidegen semlegesítjük és a metanolt desztillációval eltávolítjuk. Ily módon olajos csapadékot kapunk, amelyet etilacetáltal extrahálunk. Az oldószert ledesztilláljuk, a maradékhoz petrólé- 30 tért adunk és a keletkező port szűréssel összegyűjtjük, majd etilacctát/éter elegyböl újból kicsapjuk. Kitermelés 610 mg, az elméleti hozam 66,l"„-a. Op. 90-95 °C. [u]p-32,7° (c = 0,5, dimelilformamid). 35 Elemi analízis a C43H7()0|2NRS képlet alapján: számított: C 55,94% H 7,64% N 12,14% S 3,47%, talált: C 55,62% H 7.86% N 11,98% S 3,19% 40 (2) H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly- Leu-Met-NH2 (P anyag) szintézise 4,5 ml trifluorecetsav és 0,5 ml víz eiegyében feloldunk 0,49 g Boc-'Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu- Met-NH, vegyületet és az oldatot 10 °C-on 20 percig 45 rázzuk. Ezt követően 0,5 ml 1 n sósavoldatot adunk az oldathoz és a reakcióelegyel desztilláljuk. A maradékhoz étert adunk és a keletkező port szűréssel összegyűjtjük, majd szárítjuk. A port ezután 15 ml dimelilformamidban oídjuk és lehűlés 50 után 0,1 ml trielilamint adunk az oldathoz. Ezt követően 0,45 g Z-Arg(Mtr)-Pro-Lys(Boc)-Pro- OH-t, 0,18 g HONB-l és 0,20 g DCC-t viszünk az elegybe és az egészet 24 óra hosszat keverjük. A képződött DCU-t szűréssel leválasztjuk és a 55 szürletet betöményítjük.-- A maradékhoz vizet adunk és a keletkező csapadékot szűrőn összegyűjtjük. A csapadékból 100 mg mennyiséget feloldunk 1 ml 9 : 1 arányú trifluorecetsav/tioanizol elegyben és az oldatot 50 T-on egy óra hosszat rázzuk. 60 Ezután a trifluorccetsaval ledesztilláljuk csökkentett nyomáson, a maradékhoz étert adunk és a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, majd szárítjuk. A csapadékot kis mennyiségű vízben oldjuk és egy 1 x 10 cm méretű Amberlite IRA-410 65 oszlopon átengedjük (acetát-forma) és liofilizáljuk. A lioiilizálumot egy 2,5 x 120 cm méretű Sephadex G-25 oszlopon átengedjük és az eluálást 30%-os vizes ecelsavval végezzük. Az előállítani kívánt vegyidéiben gazdag frakciókat (230-260 ml) összegyűjtjük és liolilizáljuk. Kitermelés 58 mg. l ;]n ~ 78,8° (c = 0,5, 5%-os ecetsav); Aminosav-analízis (savas hidrolízis): l.ys 1,00(1). Arg 1,04(1), Gin 2,05(2), Pro 2,20(2); Gly 0.91(1), Met 0,89(1), Leu 1,05(1), Phe 1,89(2). Átlagos kihozatal 82,3%. Összehasonlító hatástani példa Vizsgált vegyiiletek (A) H-Arg(Tos)-OH (B) H-Are(Mbs)-OH (C) H-Are(Mts)-OH (D) H-Are(Mtr)-OH (E) H-Arg(MDS)-OH (F) H-Arg(Tms)-OH (G) H-Anz(Pme)-OH (H) H-Arg(Tmo)-OH Tos = p-melil-benzonszulfonil-csoport Mbs = p-metoxi-benzolszulfonil-csoport Mis = 2,4,6-trimetil-benzolszulfonil-csoport Körülbelül 20-20 mg N* - védett arginint feloldunk 2 2 ml trifluorecetsav és tioanizol 9 : 1 arányú eiegyében és az oldatot 50 °C-on 0,5, 1 illetve 4 órán át állni hagyjuk. Az oldat 100-100 ml adagjait 10 ml-re egészítjük ki és argininre vizsgáljuk. Az eredményeket a 4. táblázat mulatja. 4. táblázat Vizsgált TFA-tioanizol (50 °C) vegyidet 0,5 óra 1 óra 4 óra (A)-3 (B)-44 (C)-51 (D) 89 90 94 (E) 82 93 94 (F) 84 90 91 (G) 40 64 89 (H) 19 30 81 A fenti adatok mutatják, hogy a D, E, F, G és II vcgyülctcknél a szubsztituált benzolszulfonilvédőcsoportok TFA-tioanizol eleggyel könnyebben lehasíthatók, mint az A, B és C vegyieteknél az ismert védöcsc-portok. Látható, hogy az említett körülmények között az Mtr a legrövidebb időn belül (30 perc) eltávolítható védőcsoport. Szabadalmi igénypontok I. Eljárás guanidinocsoportot tartalmazó peptidek előállítására, melynek során a védőcsoporttal ellátott kiindulási vegyiiletek peptidszintézise után a védöcsoporlot eltávolítjuk, azzal jellemezve, hogy a guanidinocsoportot tartalmazó kiindulási vegyületet olyan helyettesített benzolszulfonil-kloriddal reagáltatjuk, ahol a helyettesített benzolszulfonil-13
