185022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív tetrapeptid-származékok előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás egy űj, fájdalomcsillapító hatást mutató tetrapeptid-származékok előállítására. A közelmúltban emlősök agyából és agy-gerincvelői folyadékából merfinszerű tulajdonságokkal rendelkező endogén anyagokat vontak ki. E vegyületeket enkefaiinoknak nevezik, szerkezetüket Hughes és munkatársai (Nature 258, 577 /1975/) derítették fel, eszerint az enkefnlinok az alábbi összetételű pentapeptidek: H-Tyr-Gly<ily-Phe Met-OH H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH. E két vegyületet metionin-enkefalinnak, illetve leucin-enkefalinnak nevezik. Habár kimutatták, hogy a metionin-enkçdalin és a leucin-enkefalin fájdalomcsillapító hatást mutat, ha egerek agykamrájába adjuk be őket (Buscher és munkatársai, Nature 261,423 /1976/), gyakorlatilag mégis használhatatlanok, mivel parenterálisan (a gyomor- és bélrendszer megkerülésével) adagolva nincs fájdalomcsillapító hatásuk. Ezért az enkefalinok felfedezése óta sok új enkefalin-analógot állítottak elő, abban a reményben, hogy hatásuk nagyobb lesz és, hogy parenteráiis vagy orális (szájon át) adagolás esetén biológiai hozzáférhetőségük (bioavailability) révén gyakorlatban is alkalmazhatók lesznek. Dutta és munkatársai, Life Sciences 21, 559-562 (1977) leírtak bizonyos szerkezeti változtatásokat, amelyek szerintük megerősítik az új származékok biológiai hatását. Szerintük az enkefalin-származékok hatását az alábbi szerkezeti változtatások egyikének vagy összességének bevezetésével lehet felerősíteni: a) A 2-es helyen lévő glicin helyettesítése bizonyos D- vagy a-aza-aminosavakkal, b) a terminális karboxilcsoport átalakítása metilészterré vagy ainiddá, c) a 4-es helyzetben lévő fenil-alanin módosítása a-aza helyettesítéssel, N-metilezéssel vagy az aromás gyűrű hidrogénezésével. Ezenkívül Roemer és munkatársai. Nature 268, 547-549 (1977) azt javasolják, hogy az 5-ös helyzetben lévő metionint a megfelelő karbinollá kell átalakítani, és a melioninban szereplő kénatomot S-oxiddá (szulfoxiddá) kell oxidálni. Egy további jelentős szerkezeti változtatást ismertet a 859.026. számú belga szabadalmi leírás. Eszerint az enkefalin-származékok hatását és biológiai hozzáférhetőségét azzal lehet megnövelni, ha a 2-es helyzetbe egy D aminosavat iktatnak be, a terminális karboxilcsoportot amiddá alakítják és az 5-ös helyzetben lévő aminosavat N-alkilezik. Felfedeztük az enkefalin-analógoknak egy olyan családját, amely erős fájdalomcsillapító hatást mutat. Ezek a halogénezett tetrapeptidek, amelyek nagymértékben specifikusak mind a halogénatom anyagi minőségét, mind pedig a halogénatom helyzetét tekintve. Az alábbi I általános képletű vegyületek olyan tetrapeptidek, ahol a peptid 4-es helyzetében p-fluor-helyettesített L-fenil-alanin szerepel. Az irodalom ismertet más, halogénezett 4-fcnil-alanil-enkefalin-analógokat is, ezek azonban nem tetrapeptidek, és nem is p-fiuor-helyettesített 4-fenil-alanil-enkefalin-analógok. A. R. Day és munkatársai (Res. Comm, in Chem. Path, and Pharmacol. 14 (4), 597-603 /1976/) leírja a H-Tyr-Gly-Gly-pClPhe-Nle-OH-t. R. J. Miller és munkatársai (Vitamins and Hormones 36, 297-382, Academic Press /1978/) megemlíti az alábbi vegyületeket: H-Tyr-D-Ala-Gly-pClPhe-D-Leu-OH, H-Tyr-D-Ala-Gly-pCIPhe-D-Leu-OMe és H-Tyr-D-Ala-Gly-pCIPhe-D-Leu-NHEt. Pless és munkatársai a 15. Európai Peptidszimpóziumon tartott előadásukban (1978. szeptember 4-9., Gdansk, Lengyelország) beszámoltak a H-Tyr-D-AJa-Gly-pClPhe-Met(O) OH összetételű vegyületiikről. D. H. Coy és munkatársai (BBRC 83 (3), 977-983 /1978/) említik a H-Tyr-D-Ala-Gly-F5Phe-Met-NH2-t. A fenti közlemények egyike sem ír le az alábbi 1 általános képletű vegyületek körébe tartozó származékokat, azt találtuk, hogy az enkefalin-analógok fájdalomcsillapító hatása tekintetében a halogénatomnak mind az anyagi minősége, mind pedig a helyzete döntő jelentőségű. A találmány tárgya eljárás az I általános képletű, ahol R. jelentése hidrogénatom vagy 1—3 szénatomot tartalmazó, primer alkilcsoport, R2 jelentése etilcsoport vagy 1-hidroxi-etil-csoport R2 jelentése 1^4 szénatomot tartalmazó, primer alkilcsoport, és L és D az illető szénatom konfigurációját jelölik, tetrapeptid-származékok acetátjainak előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, a peptidkémiában szokásos módon védett I általános képletű, ahol Rj, R2 és a fenti vegyületről a védőcsoportot (vagy védocsoportokat) szokásos módon lehasítjuk, majd a terméket ecetsavval kezeljük. Az I általános képletű vegyületekben lévő aszimmetriacentriumok konfigurációja e vegyületek igen lényeges vonása. Kényelmi okokból az I általános képletű pentapeptidekben szereplő aminosav-egységek a terminális aminocsoporttól kezdve megszámozzuk. Az egyes aminosav-egységek aszimmetriacentrumának konfigurációja az 1-es helytől a 4-es helyzet felé haladva: L, D, — és L. A 3-as helyzetben glicin szerepel, és ezért ezen egységek esetében nem beszélhetünk aszimmetriacentrumról. Az Rj jelentése a fentiek szerint lehet 1—3 szénatomot tartalmazó, primer alkilcsoport is. Az 1—3 szénatomot tartalrüazó, primer alkilcsoport lehet metil-, etil- vagy n-propilcsoport. Az Rjj jelentése a fenti meghatározás szerint lehet 1—4 szénatomot tartalmazó, primer illetve szekunder alkilcsoport. Az 1 -4 szénatomot tartalmazó, primer alkilcsoport lehet metil-, etil-, n-propil-, n-butil-, butilcsoport. Az I általános képletű tetrapeptidekben szereplő egyes aminosav-egységek tekintetében a következő szempontok érvényesülnek: A/l-es hely Ez a peptid N-terminális része. Ezt az egységet az L-tirozinból származtatjuk el. Ezen egység aminocsoportja lehet helyettesítetlen, ekkor Rj jelentése hidrogénatom. Ezenkívül ezen anrinosav-egység aminocsoportja viselhet egy 1-3 szénatomot tartalmazó, primer alkil-helyettesítőt, tehát lehet N-metil-, N-etilvagy N-n-propil-származék. Ahhoz, hogy parenteráiis adagolás mellett rendkívül erős fájdalomcsillapító hatású vegyületeket kapjunk, az 1-es helyzetben lévő tirozilcsoportnak előnyösen az aminocsoportján helyettesítetlennek kell lennie. Ahhoz, hogy orális adagolás mellett rendkívül erős fájdalomcsillapító hatású ve-185.022 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
