185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2-42355 antibiotikum-keveréknek nevezünk. A keveréknek az A-30912 A komponens major összetevője, míg a B, D és H az A-42355 keverék minor komponensei. A találmány szerinti eljárás során egy további alapvegyületet állítunk elő, ahol R1, R3 és R4 hidroxilcsoport és R2 karbonsav-amid-csoport. A találmány szerinti, fenti alapvegyületet S 31794/F-l alapvegyiíletnek nevezzük. Az S 31794/F-l alapvegyületet az olyan II általános képletű ciklusos peptid antibiotikum acilhasitásával állítjuk elő, ahol az általános képletben R mirisztoilcsoport és R1, R2, R3 és R4 az S-31794/F-l alapvegyület ismertetésekor megadott jelentésűek. A találmány szerinti S31794/F-1 alapvegyület előállítására az S 31794/F-l ciklusos hexapeptid antibiotikumot dezacilezzük. Az S 31794/F-l gombaellenes hatású antibiotikumot a 2.628.965. számú német, és a 4.173.629. számú amerikai szabadalmi leírás tárgyalja, előállítására az Acrophialophora limonsipora nov. spec. Dreyfuss et Muller NRRL 8095 mikroorganizmust tenyésztjük. Az S 31794/F-l vegyület az alábbi jellemzőkkel rendelkezik: 178 °C és 180 °C közötti hőmérsékleten az amorf por bomlás közben olvad, a kristályos pedig 1Ä0—183 °C hőmérsékleten szintén bomlás közben: [<*] pj. .24 közben: -24° (c= 0,5, metanolban), vagy +37° (c = 0,5, piridmben), (kristályos anyag), metanolban vizsgált ultraibolya abszorpciós spektruma: 194 nm (Ej 1%, cm: 807), 225 nm (vállas), (Et 1%, cm: 132), 276 nm (Ei 1%, cm: 12,8), 284 nm (vállas), Ej 1%, cm: 10,5), a deutero-metanolban (190 mg, 1,5 ml deutero-metanolban, belső standard tetrametil-szilán) vizsgált C13-mágneses magrezonancia spektrum (kristályos anyag) az alábbi: PPM PPM PPM 176,2 75,5 51,2 175,0 74,0 39,7 173,7 71,0 38,8 172,6 70,5 36,6 172,0 69,7 34,8 171,8 68,0 32,8 171,7 62,2 30,6 168,6 58,3 • 26,7 157,7 57,0 23,5 132,5 56,2 19,7 129,0 55,4 14,3 115,9 52,9 11.1 76,6 A kristályos anyagot 2 órán át 100 °C hőmérsékleten, erősen csökkentett nyomású térben szárítva az alábbi elemanalízist kapjuk: 55,5-56,5% szén, 7,5-7,7% hidrogén, 10,5—10,8% nitrogén és 25,5)26,0% oxigén, a vegyület metanolban etanolban, piridinben, dimetil-szulfoxidban jól oldódik, gyengén oldódik vízben, klorformban, etil-acetátben, dietil-éterben, benzolban és hexánban, a vegyület gombaellenes hatású, különösen Candida albicans mikroorganizmussal szemben. Az S 31794/F-l antibiotikum szerkezetét az olyan II általános képletű vegyület adja meg, ahol R mirisztoilcsoport, R , R3 és R4 hidroxilcsoport, és R2 karbonsav-a midcsoport. A találmány szerinti új ciklusos peptid alapvegyület, azaz az S 31794/F-l antibiotikum alapvegyülete az alábbi szerkezetű: olyan I általános képletű vegyület, ahol R1, R3 és R4 hidroxilcsoport, R? pedig kar - bonsav-amidcsoport. Az S 31794/F-l alapvegyület tapasztalati képlete C35Hs2Ng016, molekulasúlya pedig 840,87. Az alábbiakban ismertetjük az S 31794/F-l alapvegyület előállítását. A szubsztrát előállítása Az S 31294/F-l alapvegyület az S 31794/F-l antibiotikumból állítjuk elő. Az S 31794/F-l antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy az Acrophialophora limonispora limonspora NRRL 8Ó95 mikroorganizmust süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük. A mikroorganizmust letétbe helyeztük a Norther Regional Research Center, U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Culturs Collention, North Central Region, Peoria, Illinois 61604, állandó törzsgyűjteményébe, itt a törzs az NRRL 8095 számot kapta. Az egyes antibiotikumok végső tisztításához előnyösen reverz fázisú, nagyfelbontású, alacsony nyomású folyadékkromatográfiát használunk szilikagél/ C18 adszorbenssel. Az eljárás során a nyers antibiotikum-keveréket oldószerben oldjuk, az oldatot hasonló oldószerrel kiegyensúlyozott oszlopra helyezzük. Az oldószerrel ezután eluáljuk az oszlopot. Frakciókat gyűjtünk, és ezeket Candida albieans bioautográfiával és/vagy ultaibolya fényben (a viszonylagos retenciós időn alapulva) vizsgáljuk. Az egyes antibiotikum komponenseket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük. Esetenként további kromatográfiás elkülönítést kell végeznünk, az egyes komponensek tiszta alakjának elkülönítése érdekében. A nyers antibiotikumok-keveréket az A-30912 vagy A-42355 esetében például a teljes tenyészlé vagy a micélium metanolos és kloroformos extrakciójával állítjuk elő. Az antibiotikumok kromatográfiás elkülönítéséhez előnyösen metanol, víz és acetonitril 7:2:1 arányú elegyét használjuk. A nyers S 31794/F-l antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy a teljes fermentlevet etil-acetát és izopropanol 4:1 arányú elegyével extraháljuk, az extraktumot ezután kromatografáljuk. Az egyes antibiotikum-komponenseket vékonyréteg-kromatográ fiával azonosítjuk. Adszorbensként előnyösen szilikagélt használunk. Az A-30912 A-G komponensek szilikagél vékonyrétegen, benzol és metanol 7:3 arányú elegyével vizsgált R/pértékeit az I. táblázatban adjuk meg. A vizsgálatokat Candida albieans bioautográfiával végeztük. 185.021 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 5
