185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 nyomás alatt. A reakciót 2-3 órán át végezzük, ezalatt teljessé válik. Szűrjük a reakcióelegyet, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot kevés tercier-butanolban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, amiután tetrahidro-A-30912 B-t kapunk. 14. példa A tetrahidro-A-30912 D előállítása Az A-30912 D komponenst etanolban oldjuk. Abszolút etanolban platina-oxidot redukálunk platina előállítására, amit az A-30912 D komponens katalitikus redukálásra használunk hidrogénnel és pozitív nyomás alatt. A reakciót 2-3 órán át végezzük, ezalatt teljessé válik. Szűrjük a reakcióelegyet, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot kevés tercier-butanolban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, amiután tetrahidro-A-30912 D-t kapunk. 15. példa A tetrahidro-A-30912 H előállítása Az A-30912 H komponenst etanolban oldjuk. Abszolút etanolban platina-oxidot redukálunk platina előállítására, amit az A-30912 H komponens katalitikus redukálásra használunk hidrogénnel és pozitív nyomás alatt. A reakciót 2—3 órán át végezzük, ezalatt teljessé válik. Szűrjük a reakcióelegyet, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot kevés tercier-butanolban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, amiután tetrahidro-A-30912 H-t kapunk. 16. példa A. Az A-30912 A antibiotikum komponens adlhasítdsa Az 1. példában megadott módon A. utahensis mikroorganizmussal fermentálunk. Ferde agárként az A táptalajt használjuk, termelő-táptalajként pedig az I. táptalajt. A termelő-táptalajt 42 órán át inkubáljuk. A fermentációs táptalajhoz 19,7 g A-30912 A komponenst tartalmazó 340 g nyers szubsztrátot adagolunk 1,5 1 etanolban. Az A-30912 A komponens dezacilezését oly módon követjük, hogy biológiai érték-mérést végzünk Candida albicans mikroorganizmussal. Addig folytatjuk a fermentációt, míg az acilhasítás teljes, amit a C. albicans mikroorganizmussal szembeni aktivitás megszűnése jelez. B. Az A-30912 A alapvegyület izolálása Az A. pontban megadottak szerint előállított 1001 teljes fermentlevet, amely körülbelül 20 g A-30912 A komponensből előállított alapvegyületet tartalmazza, szűrjük. A mícéliumot kidobjuk. A tiszta szűrletet (kb. 93 1) 4,5 1 HP-20 gyantát (diaion High Pórus Polymer, HP-Series, Mutsubishi Chemical Industries Limited, Tokyo, Japan) töltött oszlopon kromatografáljuk 200 ml/perces sebességgel. A kapott effluenst kidobjuk. Az oszlopot 8 oszlopnyi térfogató, 6,5-,75 közötti pH-jú ionmentes vízzel mossuk a szennyező anyagok eltávolítására. A mosófolyadékot kiöntjük. Ezután víz és metanol 13 arányú elegyének 85 literével eluálunk, az eluálás sebessége 200-300 ml/perc. Az eluálást az alábbi eljárással követjük: mindegyik eluátumból 2 alikvot mintát veszünk. Az egyiket kis térfogatúra töményítjük, és savkloriddal, például mirisztoil-kloriddal kezeljük. Ezt és a másik, nem kezelt mintát Candida albicans mikroorganizmussal szemben értékeljük. Ha a nem kezelt minta nem aktív, és az acilezetl minta aktív, úgy a frakció A-30912 A alapvegyületet tartalmaz. Az A-30912 A alapvegyületet tartalmazó eluátumokat csökkentett nyomáson desztillálva töményítjük és fagyasztva szárítjuk, amiután 97 g nyers alapvegyületet kapunk. C. Az A-30912 A alapvegyületet tisztítása reverz fázisú folyadékkromatográfiával 25 g, az előző pont szerinti előállított nyers A-30912 A alapvegyületet 300 ml alábbi összetételű elegyben oldunk: víz, açetonitril, ecetsav és piridin 96:2:1 ;1 arányú elegye. Az oldatot 8 cm x 80 cm méretű, 4 1 térfogatú saválló acélból készült, 2540 ju szemcsenagyságú Lochroprep RP-18 gyantával töltött oszlopon kromatografáljuk (MC/B Manufacturing Chemists, Inc. E/M, Cincinati, Ph). Az oszlop része a Chromatospec Prep 100 egységnek (Jobin Yvon, 16-18 Rue du Canal 91160 Longjumeau, Franciaország). Az oszlop 0,36—0,45 atm nyomáson működik, az áramlási sebesség 60 ml/perc. Oldószerként a fenti oldószert használjuk. Az anyag elkülönítését 280 nmen működő UV-monitoron követjük (ISCO Absorption Monitor Model UA-5, Instrumention Specialties, Co., 4700 Superior Ave., Lincoln, Nebraska 68504), ami ISCO Type 6 optikai egységgel van felszerelve. Minden percben 500 ml térfogatú frakciókat különítünk el. A 280 nm-es hullámhosszon mért abszorpció alapján egyesítjük az A-30912 A alapvegyületet tartalmazó frakciókat, csökkentett nyomáson desztilláljuk, a desztillációs maradékot pedig fagyasztva szárítjuk, amikor 2,6 g alapvegyületet kapunk. A kromatográfiás elkülönítési folyamat során 7—8 1 oldószerre van szükségünk. D. Az A-30912 A alapvegyület jellemzői a) tapasztalatai képlet : C3 4 H5 ! N7 015. b) Molekulasúly : 797,83. c) Az anyag fehér színű, amorf, szilárd halmazállapotú vízben dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxídban, metanolban oldódik, kloroformban, toluolban és dietil-éterben oldhatatlan. d) A kálum-bromid tablettában vizsgált infravörös abszorpciós spektrumban az alábbi hullámhosszakon látszik elnyelési maximum: 3303, széles (hidroxilcsoport, H-kötések), 2970, 2930 és 2890 (CH, alifás metilcsoprot, metíléncsoport, CH-csoportok), 1660 és 1625 (több karbonilcsoport), 1510-1550, 1430-1450 (CH-), 1310-1340, 1230-1260, 1080, 835, 650, széles, továbbá 550, széles, cm" . e) a 66%-os vizes dimetil-formamidban végzett elektrometrikus titrálás szerint a vegyület 7,35 pKa* értékkel jellemezhető (eredeti pH 7,32) titrálható csoportot tartalmaz. f) A nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatkor kapott retenciós idő (K”): 11,52 perc. Ezt az alábbi rendszerben mértük: oszlop:4 x 300 mm töltőanyag: szilikagél/C, 8 ammónium-acetát és acetonitril, továbbá víz 1:2:97 arányú elegye áramlási sebesség: 3 ml/perc nyomás: 100 atm detektor: változatható hullámhosszúságú ultraibolya detektor, 230 mm érzékenység: 0-0,4 A.U.F.S. 17. példa A 16. példában megadottak szerint eljárva, azzal a különbséggel, hogy szubsztrátként tetrahidro-A•30912 A-t használunk, előállítjuk az A-30912 A alapvegyületet. 185,021 5 10 15 20 25. 30 35 40 45 50 55 60 14
