185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 séggel mozgatjuk az oszlopon tá 0,2 atm nyomáson, F.M.I. pumpa segítségével. Minden második percben elkülönítünk egy frakciót. Az antibiotikum eluálódását 280 nm-en működő UV-monitorral követjük (1SCO Model UA-5) ISCO Type 6 optikai egységgel. A 96-108. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson olajos-desztillációs maradékig desztilláljuk. Az olajat kevés tercier-butanolban oldjuk, az oldatot fagyasztva szárítjuk, ezután 89 mg A-30912 D komponenst kapunk. 7. példa Az A-30912 H komponens izolálása A 2. és 3. példában megadottak szerint előállított A-42355 antibiotikum komplex 5,0 g-ját 35 ml alábbi elegyben oldjuk: metanol:víz:acetonitril 7:2:1 arányú elegye. Az oldatot szűrjük és 3,7 cm belső átmérőjű, és 42 cm magas Michel-Miller kromatografáló oszlop tetejére töltjük, oszloprendszer segítségével. Az oszlopot metanol, víz és acetonitril 7:2:1 arányú elegyével a 10. példában megadott módon készült LP-l/Cie reverz fázisú, 10—20 p szemcseméretíí szilikagéllel töltjük, all. példában megadottak szerint eljárva. Az oluószert 0,5 atm nyomáson 13 ml/perc sebességgel áramoltatjuk F.M.I. szelepmentes pumpa segítségével. Két percenként különítünk el egy frakciót. Az antibiotikum eluálódását 280 nm-en működő UV-fotométerrel követjük, ahogy azt a 19. példa C. pontjában megadjuk. A 112—132. frakciókat öszszegyűjtjük, és összeöntjük egy második, hasonló módon levégzett tisztítás 106—117. frakciójával. Az egyesített frakciókat csökkentett nyomáson olajos-desztillációs maradékig pároljuk. Az olajos anyagot kevés tercier-butanolban oldjuk, és fagyasztva szárítjuk, amiután 173 mg A-30912 H komponenst kapunk. 150 mg nyers A-30912 H komponenst metanol, víz és acetonitril 7:2:1 arányú elegyének 8 ml-ében oldunk, a kapott oldatot szűrjük, és a fentiek szerint eljárva 2,0 cm belső átmérőjű, és 32 cm magas Üvegoszlopon lévő szilikagél tetejére töltjük. Az oldószert 0,3 atm nyomáson 8 ml/perc sebességgel áramoltatjuk, 3 percenként különítve el egy-egy frakciót. Az antibiotikum eluálódását 280 nm-en figyeljük. Egyesítjük a 17. és 18. frakciókat, csökkentett nyomáson desztilláljuk, amiután olajos desztillációs maradékot kapunk. Ezt az anyagot kevés tercier-butanolban oldjuk, és fagyasztva szárítjuk, amiután 29 mg A-30912 H komponenst kapunk. 8. példa Az S 31794/F-l antibiotikum előállítása Az S 31794/F-l antibiotikumot az Acrophialophora limonispora NRRL 8095 mikroorganizmus süllyesztett, keverés, rázatás és/vagy levegőztetés közbeni tenyésztésével állítjuk elő 3 és 8, előnyösen 5 és 7 közötti pll-n, 15 °C és 30 °C, előnyösen 18-27 °C közötti hőmérsékleten. A tenyésztést 48 óra és 360 óra, előnyösen 120 óra és 288 óra közötti időn át végezzük. Az S 31794/F-l antibiotikum izolálására 90 1 tenyészlevet etil-acetát és izopropanol 4:1 arányú elegyének 90 1-ével kezelünk és 30 percen át szobahőmérsékleten homogenizálunk. Elkülönítjük a szerves fázist, és csökkentett nyomáson, 40 °C hőmérsékleten desztilláljuk. A desztillációs maradékot 10-szeres mennyiségű szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk, az eluálást metanol és kloroform 5:95 és 40:60 közötti arányú elegyével végezzük. A gombaellenes aktivitással rendelkező frakciókat összegyűjtjük és 100-szoros mennyiségű Sephadex LH-20 gyantán kromatografáljuk, az eluálást metanollal végezve. Az oszlopról lejövő, gombaellenes aktivitással rendelkező frakciókat összegyűjtjük és 100-szoros mennyiségű, 0,05—0,2 mm szemcseméretű szilikagélből készült oszlopon, az eluálást kloroform, metanol és víz 71:25:4 arányú elegyével végezve újra-kromatografáljuk. Az eluálódó frakciók közül azokat, amelyek gombaellenes hatással rendelkeznek, összegyűjtjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk, miután desztillációs maradékként nyers S 31794/F-l antibiotikumot kapunk. Ezt a terméket kevés metanolban oldjuk, és dietil-éterrel kicsapjuk, amiután fehér színű, amorf, por-alakú anyagként 178—180 °C közötti hőmérsékleten bomlás közben olvadó S 31794/F-2 antibiotikumot kapunk. Ezt 25 °C és 30 °C közötti hőmérsékleten, csökkentett nyomású térben szárítjuk. A terméket 10-szeres mennyiségű etil-acetát, metanol és víz 80:12:8 arányú elegyéből kikristályosítjuk, amiután csökkentett nyomású térben 20 °C hőmérsékleten szárítjuk a kristályokat, így 181 — 183 °C hőmérsékleten bomlás közben olvadó, kristályos S 31794/F-l antibiotikumot kapunk. 9. példa Az S 31794/F-l antibiotikum izolálása A 8. példában megadott módon előállított, nyers S 31794/F-l antibiotikumot Sphadex gyantával végzett kromatográfía után szeleprendszer segítségével Michel-Miller oszlopban lévő szilíkagélre juttatjuk. Az oszlopot a 10. példában megadottak szerint előállított LP-l/Cjg reverz fázisú, 10—20 p szemcseméretű szilikagélből készítjük, a szuszpendálást kloroform, metanol és víz 71+25:4 arányú elegyében végezzük. All. példában megadottak szerint végezzük az oszlop feltöltését. Az oldószert az oszlopon F.M.I. szelepmentes pumpával áramoltatjuk. Az antibiotikum eluálódását 280 nm-en működő UV-monitorral követjük. A gombaellenes aktivitással rendelkező frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradékként megkapjuk az S 31794/F-l antibiotikumot. 10. példa A szilikagél/Ci s reverz fázisú gyanta előállítása 1. lépés: hidrolízis LP-1 szilikagélt (1000 g, Quantum Corp., most Whatman) adunk 1650 ml tömény kénsav és 1650 ml tömény salétromsav elegyéhez, amit 5 literes kerekaljú, gömblombikba töltünk, és megfelelő szuszpenzió előállításához rázunk. 16 órán át gőzfürdőben melegítjük a szuszpenziót, a lombikhoz vízhűtővel ellátott kondenzálócsövet kapcsolunk. Jégfürdőben lehűtjük az elegyet, és óvatosan szűrjük üvegszűrőn át. Ionmentes vízzel addig mossuk a szilikagélt, míg pH-ja semleges lesz. Ezután 4 liter acetonnal mossuk és csökkentett nyomású térben, 100 °C hőmérsékleten 2 napon át szárítjuk. 2. lépés: az első szililezés Az első lépésben kapott száraz szilikagélt gömblombikba töltjük és 3,5 1 toluolban szuszpendáljuk. 2 órán át gőzfürdőben melegítjük a szuszpenziót, a visszamaradt víz azeotrop desztillálójára. 321 ml oktadexil-triklór-szilánt (aldirch Chemival Company) adunk hozzá, maid 16 órán át enyhe kevergetés mellett 60 °C hőmérsékleten visszacsepegő hűtő alatt reagál-185.021 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 12
