184959. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-etanol-származékok előállítására
19 184959 20 Aszkorbinsav 0,1 g Nátrium-piroszulfit 0,01 g Dinátrium-etilén-diamin-tetraacetát 0,01 g Narancsesszencia 0,025 g Engedélyezett színezék 0,015 g Tisztított víz kiegészítve 100,0 ml-re. Farmakológiai vizsgálatok A) Terbutalin szérum-szintjének állása a találmány szerinti vegyületek éber kutyáknak való beadása után Vizsgálati módszer Öt darab 13—18 kg-os hím beagle kutyát használ- 15 tunk ismételten a vizsgálatban. Egy-egy kutyát hetente legfeljebb egyszer használtunk. A kísérletek előtti éjjel megvontuk a táplálékot az állatoktól (vizet tetszés szerint ihattak). A vizsgált vegyületet 8 ml desztillált vízben oldottuk, és fecskendővel és egy kis csővel a száj hátsó részébejuttattuk. Ezt a szájon át való beadást 8 ml vízzel végzett öblítés követte. A vért a mellső lábak fővénáiból vettük evakuált csövekbe. Diizopropil-fluoro-foszfát (DIFP) észteráz inhibitort adtunk hozzá, majd a mintákat +5 °C-on centrifugáltuk, és a plazmában lévő terbutalin mennyiségét tömegfragmentográfiás analízismódszerrel határoztuk meg. A terbutalin szérum-szintje a vizsgált ve- 5 gyületek hörgőgörcsoldó hatásának fokozatát jelzi. A beadandó vizsgálati anyagok mennyiségét úgy választottuk meg, hogy a terbutalin szintje megfeleljen a páciensekben klinikai használatnál kapott és megfelelőnek talált szérum-szinteknek, azaz legalább 2 ng/ml 10 terbutalin szintnek 6—8 órára. A találmány szerinti vizsgálati anyagok dózisait úgy választottuk meg, hogy a kapott terbutalin szérum-szintek közelítőleg megfeleljenek magának a terbutalinnak a beadása után kapott szérum-szinteknek. Vizsgálati eredmények A vizsgálati eredményeket az alábbi 1. táblázatban közöljük, ahol a terbutalin szérum-szint lefutását adjuk meg a kísérleti állatokban. Minden egyes szérum-szint 20 adatsor egy kutyán végzett vizsgálat eredménye. A bekeretezett időköz azt az időközt jelenti, ahol klinikailag hatásos terbutalin szérum-szintet kaptunk. így a bekeretezett időköz a vizsgált vegyületek klinikailag hatásos időtartamát jelenti. 1. táblázat Terbutalin szérum-szintek (ng/ml) terbutalin és különböző terbutalin-észterek kutyáknak szájon át való beadása után Vegyület számú Vizsgált la általános képletű vegyület Vizsgált vegyület beadott mennyisége (mg/lcg) Mért terbutalin szérumszint (ng/ml) a beadás után (idő órában) R1 R2 1 2 3 4 6 8 12 16 24 hidrogénatom hidrogénatom (terbutalin, vonatkoztatási vegyület) 0,1 5J 13,7 9,2 6,1 3,4 2,2 U 0,8 0,35 hidrogénatom hidrogénatom 0,03 4,8 2,9 2,4 2,2 1,9 (nem mértük) i N,N-dimetil-N,N-dimetil-0,6 0,5 2,2 4,0 7,3 8,0 7,1 5,5 3,8 1,9-karbamoil-karbamoil! ii N-etil-kar-N-etil-karba-1.0 10,3 — 10,0 9,4 6,7 5,0 3,1 2,0 0,9 bamoilmoil-Az 1. táblázatból látható, hogy a találmány szerinti vizsgálati anyagok 16 órán át vagy tovább tartanak fenn 2 ng/ml vagy magasabb szintet. A vonatkoztatási anyag — a terbutalin — ilyen megfelelő szérumszintet körülbelül 8 óráig adott, ami a terbutalin klinikai alkalmazásánál rendesen kapott időtartam. B) Maguknak a találmány szerinti vegyületeknek a hörgőtágító hatása Bl In vitro vizsgálat kipreparált tengerimalac légcső vön Vizsgálati módszer A légcsövet kimetsszük a tengerimalacokból, spirálisan felvágjuk, és 10 ml 37 °C-os Krebs-oldatot tartalmazó szervfürdőbe helyezzük, és carbogennel levegőztetjük. A légcső-csíkot pilokarpinnal (4 x 10-6 mol/liter) összehúzódásra bírjuk, körülbelül 1,5 g feszítést létrehozva. Izometriás felvételt készítünk FT03 átalakítóval és Grass FD poligráflfal. A vizsgálandó vegyület beadása előtt eserin észteráz-inhibitort adunk a fürdőhöz lxl0_6 mol/liter koncentrációban. Megállapítjuk a vizsgált anyagok azon koncentrációját, amely a pilokarpinnal összehúzott légcső 50%-os elernyedését (EC50) okozza, valamint a találmány szerinti vizsgált anyagok fokozó vagy gátló hatását terbutalin elernyesztő hatására. Ebben a legutoljára említett vizsgálatban az izomkészítményt 5 percig előkezeljük a vizsgált vegyületekkel, mielőtt a terbutalinra adott választ 60 felvesszük. Vizsgálati eredmények : A vizsgálati eredményeket a következő 2. táblázat- 65 ban adjuk meg. 50 55 11
