184892. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7- [3- (4-dihidroxi-5-pirimidinil)-ureido]-acetamido - 3-tiometil-cef-3-ém- 4-karbonsav-származékok előállítására
21 184892 22 Az I. táblázat folytatása A találmány szerinti cefalosporinok hatékonyságát például a következő vizsgálatokkal lehet kimutatni. 1. In vitro kísérletek Vizsgálatainkban a sorozat-hígítás módszerét mikrotiter-rendszerben alkalmaztuk. A vegyületeknek a bak- 5 tériumfejlődésre gyakorolt gátló hatását folyékony közegben vizsgáltuk. A hatást a következő koncentrációkban tanulmányoztuk. >64, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,125, 0,06, 0,03, 0,015 jxg/ml. A következő összetételű táptalajt alkalmaztuk : 10 g pepton, 8 g marhahúskivonat, 3 g nátrium-klorid, 2 g dinátrium-hidrogén-foszfát desztillált vízzel 100 ml-re feltöltve. Az oldat pH-ja 7,2—7,4. Csupán a sztreptokokkuszok elleni vizsgálatnál adtunk az oldathoz 1% glükózt is. Az elsődleges tenyésztés 20 óra hosz- 15 szat tartott. A sejtszuszpenzió beállítását Eppendorf szerinti fotométerrel 14 mm átmérőjű kémcsövet és 546 nm szűrőt használva végeztük olyan bárium-szulfát szuszpenzió zavarosságával összehasonlítva, amelyet 97 ml 1%-os kénsavoldathoz 3,0 ml 1%-os bárium- 20 -klorid oldatot adva kaptunk. A beállítás után a sejtszuszpenziót 1: 1500 arányban nátrium-klorid oldattal tovább hígítottuk. Mindegyik vegyületből 16 mg-ot 10 ml-es mérőlombikokba mértünk be és az oldószerrel jelig feltöltöttük. A további hígítássorozatot desztillált vízzel vagy a mindenkori oldószerrel állítottuk elő. A mikrotiter lemezkék mélyedéseibe 0,2 ml folyékony táptalajt, a megfelelő vegyülethígítás 0,01 ml-jét és egy csepp (0,01 ml) sejtszuszpenziót adtunk és 18—20 óra hosszat 37 °C-on inkubáltuk. Kontrollként mindenkor oldószert is ugyanakkor inkubáltunk. 10 A leolvasásokat szabad szemmel végeztük és határkoncentrációként a még baktériumfejlődést gátló legkisebb koncentrációt határoztuk meg. Kísérleti mikroorganizmusokként a következő törzseket alkalmaztuk : Staphylococcus aureus SG 511, Escherichia coli ATCC 11 775, Pseudomonas aeruginosa Hamburgensis és Pseudomonas aeruginosa BC 19, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ATCC 10 031 és BC 6, Proteus mirabilis BC 17, Proteus rettgeri BC 7, Enterobacter cloaceae ATCC 13 047 és Escherichia coli B-f TEM (ß-laktamäz-termelö). A II. táblázatban a találmány szerinti típusos vegyületeknél megállapított legkisebb gátló koncentrációt II. táblázat Különféle cefalosporinok LGK értékei (jzg/ml) Vegyület S. aureus SG 511 E. coli ATCC 11 775 Pseud. aerug. Hbg. Pseud, aerug. BC 19 Klebs. pneum. ATCC 10031 Klebs. pneum. BC Prot. mír. BC 17 Prot. rettg. BC 7 Eb. cloaceae E. coli R+TEM Serr. marc esc. ATCC 13 880 Cefuroxim í 8 100 100 2 4 0,5 2 32 4 8 Cephazolin 0,06 4 100 100 1 2 4 100 100 4 100 5. 4 0,5 8 8 0,5 0,5 0,12 0,25 2 32 0,5 7. 1 0,03 4 4 0,12 0,12 0,06 0,25 0,25 4 0,12 16. 0,12 0,12 8 4 0,12 0,25 0,12 0,25 0,25 4 0,25 21. 1 0,12 8 8 0,25 0,25 0,12 0,5 — 8 0,25 30. 2 0,12 8 4 0,5 0,5 0,06 1 0,5 8 0,5 36. 2 0,03 4 2 0,12 0,12 0,06 0,25 0,12 8 0,25 37. 2 0,12 8 4 0,12 0,12 0,06 0,25 0,12 8 0,12 12
