184793. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 7-[(4-hidroxi-5-pirimidinil)-ureido]-acetamido-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav-származékok előállítására
1 184 793 2 A R Y D E 212 /0H nh-/^V-so2nh2 H-OCOCH3 H 213HO-<^y* NHCOCH3 H-OCOCH3 H 214 NHCOCH3 1 H N— N 1 CH3 H 215 NHCOCH3 t H N— N 1 I H 216 NH-^SO,^ H 1 CH3 — A találmány szerinti cefalosporinok hatásosságát pél- 35 dául a következő vizsgálatokkal lehet kimutatni. I. In vitro vizsgálatok Ezekben a vizsgálatokban a sorozat-hígításos módszert mikrotiter-rendszerben alkalmaztuk. A vegyületeknek a baktériumok fejlődését gátló képességét folyékony táptalajban vizsgáltuk. A baktériumokra gyakorolt hatást a következő koncentrációkban vizsgáltuk: 80, 40, 20,10,5,2,5,1,25,0,6,0,3,0,08 és 0,02 pg/ml. A következő összetételű táptalajt használtuk: 10 g pepton, 8 g marhahúskivonat, 3 g nátrium-klorid, 2 g szekunder nátrium-foszfát desztillált vízzel 100 ml-re feltöltve (az oldat pH-ja 7,2-7,4). Csak a Streptococcus-féleségek vizsgálatánál adtunk hozzá még I % glukózt is. Az elsődleges tenyésztés időtartama körülbelül 20 óra volt. A csíraszuszpenzió beállítását „Eppendorf”-féle fotométerrel (kémcsőátmérő 14 mm, szűrő 546 nm) végeztük olyan bárium-szulfát szuszpenzió zavarosságával való összehasonlítás útján, amelyet úgy állítottunk elő, hogy 97 ml, 1 %-os kénsavhoz 3,0 ml 1 %-os bárium-klorid oldatot adtunk, és a keletkezett bárium-szulfátot szuszpendáltuk. A beállítás után a Streptococcus Aronson szuszpenziót 1 • 15 arányban, és a többi mikroorganizmust 1:1500 arányban nátrium-klorid oldattal tovább hígítottuk. A mindenkori vizsgálandó vegyidet 16 mg-ját 100 ml - -es mérőlombikba mértük be, és az oldószerrel jelig feltöltöttük. A további sorozatos hígításokat desztillált vízzel vagy a mindenkori oldószerrel végeztük. A mikrotiter lemezek mélyedéseibe 0,2 ml táptalajt, 40 a megfelelő hígított vegyidet 0,01 ml-ét, és egy csepp (0,01 ml) sejtszuszpenziót helyeztünk és 18—20 óra hosszat 37 °C-on inkubáltuk. Kontrollként mindig oldószert is inkubáltunk. A leolvasást makroszkóposán végeztük és a minden- 45 kori határkoncentrációt (baktériumfejlődést gátló legkisebb koncentráció) határoztunk meg. A következő mikroorganizmusokat vizsgáltuk: Staphylococcus aureus SC 511, Staphylococcus aureus E 88 (ßlaktamáz-termelő), 50 Escherichia coli ATCC 11 775, Pseudomonas aeruginosa Hamburgensis és Paeudomonas aeruginosa Walter, Serratia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumoniae ACC 10 031 és 272, 55 Proteus mirabilis Hamburgensis, Proteus Rettgeri Eb. doaceae ATCC 13 047, Escherichia coli R+TEM ((Uaktamáz-termelő). A III. táblázatban a találmány szerinti vegyületek típusos képviselőinek legkisebb gátló koncentrádóit 60 (LGK) tüntetjük fel. A II. táblázatban megadjuk a vizsgált vegyületeket (nátriumsójuk alakjában). összehasonlító vegyidéiként a kereskedelemben kapható két típusos cefalosporint használtunk. 65 23
