184769. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új D-homo-szteroidok előállítására
1 184 769 2 Találmányunk tárgya eljárás (I) általános képletű új D-homo-szteroidok előállítására (mely képletben a pontozott vonal jelentése az 1,2-helyzetben adott esetben jelenlevő szén-szén kötés; R6 jelentése hidrogén-, fluor- vagy klóratom vagy metilcsoport; R17“ jelentése hidroxil- vagy 1-7 szénatomos alkanoiloxi-csoport; azzal a feltétellel, hogy az (I) általános képletű 11,17adihidroxi-vegyületek esetében R6 klóratomot vagy metilcsoportot képvisel). A leírásban használt „1-7 szénatomos alkanoiloxi-csoport” kifejezésben telített vagy telítetlen karbonsavakból leszármaztatható csoportokat értünk. E csoport előnyösen pl. valamely alábbi karbonsavból származtataható le: hangyasav, ecetsav, trifluorecetsav, pivalinsav, propinsav, vaj sav, kapronsav, önántsav. Előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek az 1,2-helyzetben kettőskötést tartalmazó (I) általános képletű vegyületek. Az (I) általános képletű vegyületek különösen előnyös képviselői az alábbi származékok: 17-butiriloxi-ll ce-hidroxi-D-homo-pregna-1,4-dién-3,20- -dion; 6a-klór-ll/3-17a-dihidroxi-D-homo-pregna-l,4-dién-3,20--dion; 17a-butiriloxi-6a-fluor-ll/3-hidroxi-D-homo-pregna-l,4--dién-3,20-dion; 17a-valeroiloxi-6a-klór-ll/3-hidroxi-D-homo-pregna-l,4--dién-3,20-dion; ll/3,17a-dihidroxi-6a-metil-D-homo-pregna-4-én-3,20--dion; 17a-butiriloxi-ll/3-dihidroxi-6a-metil-D-homo-pregnal,4-dién-3,20-dion ; 11 a,17a-dihidroxi-6a-metil-D-homo-pregna-l ,4-dién-3,20-dion; 17a-butiriloxi-l lj3-dihidroxi-6a-metil -D-homo-pregna-1,4-dién-3,20-dion; A találmányunk tárgyát képező eljárás szerint az (I) általános képletű D-homo-szteroidokat oly módon állíthatjuk elő, hogy valamely (II) általános képletű D-homoszeroidot (mely képletben R6 és R17 jelentése a fent megadott) valamely, a Curvularia lunata specieshez, például C. lunata NRRL 2380 és NRRL 2178, ATCC 13633, 13432, 14678, IMI 77007, IFO 2811, tartozó mikroorganizmus felhasználásával a 11/3-helyzetben hidroxilezünk; kívánt esetben egy, az 1,2-helyzetben telített (I) általános képletű D-homo-szteroidot valamely, az Arthrobacter simplex specieshez (például A. simplex ATCC 6946) vagy a Bacillus genushoz, például B. lentus ATCC 13805 és B. sphaericus ATCC 7055, tartozó mikroorganizmus felhasználásával az 1,2-helyzetben dehidrogénezünk. A (II) általános képletű vegyületek hidroxilezését szeroidok 11-hidroxilezésére önmagukban ismert mikrobiológiai módszerekkel végezhetjük el. A 11/3-hidroxilezést az alábbi mikroorganizmusokkal hajtjuk végre: Curvularia lunata speciels, pl. C. lunata NRRL 2380, és NRRL 2178, ATCC 13633, 13432, 14678, IMI 77007, IFO 2811. Az 1,2-helyzetben telített (I) általános képletű D-homo-szteroidok dehidrogénezését önmagukban ismert módszerekkel mikrobiológiai úton végezhetjük el. Az 1,2-dehidrogénezést valamely alábbi mirkroorganizmussal végezhetjük el: Arthrobacter simplex species, pl. A. simplex ATCC 6946; Bacillus genus, pl. B. lentus ATCC 13805 és B. sphaericus ATCC 7055. Az (I) általános képletű vegyületeket a gyógyászatban gyulladásgátló hatásuk révén pl. gyulladásos betegségek (pl. ekcéma) kezelésére alkalmazhatjuk. A találmányunk szerinti eljárással előállítható gyógyászati készítmények belsődleges adagolás esetén 0,01-5,0% (I) általános képletű D-homo-szteroidot tartalmazhatnak. A napi dózis a beteg állapotától és a kívánt kezelés időtartamától függően 0,05-10 mg lehet. Helyi kezelésre szolgáló gyógyászati készítmények általában 0,0001-5 súly%, előnyösen 0,001-0,5 súly%, különösen előnyösen 0. 01-0,25 súly% (I) általános képletű hatóanyagot tartalmazhatnak. A hatóanyagot enteráüs, perkutáns vagy parenterális adagolásra alkalmas gyógyászati készítmények alakjában formulázhatjuk. A készítmények hatóanyagot és iners, szilárd vagy folyékony gyógyászati hordozóanyagot tartalmaznak. Iners szervetlen vagy szerves hordozóanyagként pl. vizet, zselatint, gumi arabikumot, tejcukrot, keményítőt, magnézium-sztearátot, talkumot, növényi olajokat, polialkilénglikolokat, vazelint stb. alkalmazhatunk. A gyógyászati készítményeket pl. kenőcs vagy oldat, szuszpenzió, emulzió stb. alakjában formulázhatjuk. A készítmények adott esetben sterilezhetők illetve segédanyagokat (pl. konzerváló-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgeálószereket, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat vagy puffereket) továbbá gyógyászatilag értékes anyagokat is tartalmazhatnak. Találmányunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy azt a példákra korlátoznánk. 1. példa 1% kukoricalekvárt (víztartalom 52%, a mennyiség nedvessúlyra vonatkozik; gyártó cég: Roquette Frères, Lille, Franciaország), 1% szójaport (finomraőrölt termék, gyártó cég: Hafen-Mühlen-Werke, Bréma) és 0,005% szójaolajat tartamazó 500 ml táptalajt (pH = 6,2) autoklávban 120 °C-on 30 percen át sterilezünk, majd 2 literes Erlenmeyer-lombikba töltjük, Curvularia lunata (NRRL 2380) liofilizált tenyészetével beoltjuk és forgó rázatógépen 30 °C-on 72 órán át rázatjuk. Az előtenyészettel 20 literes rozsdamentes acél-fermentorban levő, 15 liter térfogatú, 1% kukoricalekvárt, 0,5% keményítőcukrot és 0,005% szójaolajat tartalmazó, 6,2 pH-jú, 1,1 att. nyomáson 121 °C-on sterilezett táptalajt beoltunk. Szilikonolaj (Szilikon SH, gyártó cég: Wacker-Chemie, München) habzásgátló hozzáadása mellett 29 °C-on levegőztetés (101/perc) közben 24 órán át tenyésztjük. 1 liter tenyészetet steril körülmények között 14 liter, 1% kukoricalekvárt, 1,25% szójaport (őrölt, gyártó cég: Hafen-Mühlen-Werke, Bréma) és 0,005% szójaolajat tartalmazó, sterilezett táptalajhoz adunk és a fenti körülmények között tenyésztjük. 12 óra múlva 4 g 17aa-acetoxi-D-homo-4-pregnén-3,20-dion és 100 ml dimetil-formamid oldatát adjuk hozzá. A fermentor tartalmát 52 óra múlva 2x10 1 metil-izobutil-ketonnal kikeverjük és az extraktumot 50 °C-os fürdőhőmérsékleten vákuumban pároljuk. A maradékot a szilikonolaj eltávolítása céljából hexánnal többször mossuk, szilikagél-oszlopon kromatografáljuk és hexánnal, valamint 1:1 arányú hexán-etilacetát eleggyel végzett eluálással az átalakulatlan kiindulási anyagtól elválasztjuk. A kapott 17aa-acetoxi-ll/3- -hidroxi-D-homo-4-prengén-3,20-dion izopropiléteres 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
